D181调控TLR9信号影响DCs分泌CXCL-10的机制研究

发布时间：2017-04-29 18:12

  本文关键词：D181调控TLR9信号影响DCs分泌CXCL-10的机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：Toll样受体(Toll like receptors, TLRs)是一种主要表达于树突状细胞(Dendritic cells, DCs)、B细胞、巨噬细胞等免疫细胞的病源模式识别受体,其通过识别不同的病原微生物活化特异的信号通路,能够激活天然免疫和获得性免疫从而调节机体的免疫反应。目前,哺乳动物中已发现的TLRs有13种,人类中有10种,小鼠中有13种。其中,TLR9通过识别未甲基化的富CpG-DNA介导机体对病毒、细菌的清除,在多种免疫性疾病如自身免疫病、肿瘤等中发挥关键作用,是治疗疾病的关键所在。DCs是体内功能最强的专职抗原递呈细胞,在天然免疫和适应性免疫的衔接中起着关键的作用。含CpG基序寡核苷酸(CpG-ODN)可激活DCs的TLR9通路促进其成熟并影响DCs的免疫功能。目前临床上用于调控DCs的TLR9信号通路的药物非常有限且并不完善,因此寻找新的有效的小分子药物有望弥补治疗手段的不足。 本实验室前期实验表明,D181可以抑制TLR4信号通路的活化,调控相关炎症因子的产生,改善TLR4通路相关疾病脓毒症的症状。本课题以小鼠骨髓诱导来源的树突状细胞作为研究对象,研究D181对CpG诱导活化的树突状细胞的影响并探讨D181对DCs的TLR9通路的调控机制。 首先我们用CCK8法检测D181对BMDCs的细胞毒性,结果显示一定浓度内的D181(0-200μM)对细胞的活力没有影响。接着我们用Annexin V/PI双染法检测D181对BMDCs凋亡的影响,发现在0-200μM范围内D181不影响BMDCs凋亡。随后我们用实时荧光定量PCR检测D181对CpG刺激的BMDCs分泌的促炎性细胞因子(IL-12, IL-6, CXCL-10和TNF-α)在mRNA水平表达的影响,显示D181能够抑制CpG引起的BMDCs促炎性细胞因子的表达,其中D181对CXCL-10表达的抑制效果最为明显。CXCL10(interferon-y inducible protein10, CXCL-10)是一种属于CXC亚家族的趋化因子,主要表达于成纤维细胞、内皮细胞及DCs等细胞,能够介导DCs与T细胞的相互作用,而且在多种疾病如SLE、AR、肿瘤等的发生发展中发挥重要作用。CXCL-10与DCs的功能相关,因此我们用流式细胞术检测BMDCs表面标志(CD80, CD86, CD40, MHCⅡ),发现D181可以下调表面标志和共刺激因子的表达。用吞噬实验检测D181对BMDCs细胞吞噬FITC-右旋糖酐能力的影响,发现D181不影响BMDCs的吞噬功能。 为进一步探索D181对CXCL-10产生的影响及其作用机制,我们用不同浓度的D181预处理后加入CpG刺激,检测CXCL-10的mRNA水平和蛋白水平的变化,发现D181能够在转录水平和翻译水平剂量依赖性抑制CXCL-10的表达。为研究BMDCs中CXCL-10变化的作用,用Transwell实验检测D181对BMDCs趋化T细胞能力的影响,发现与单独CpG刺激相比,加入D181后BMDCs趋化T细胞的能力明显下降。为研究D181发生作用的机制,用ERK、JNK、p38和STAT1的通路抑制剂预处理BMDCs,检测CpG刺激BMDCs引起的CXCL-10的mRNA及蛋白水平的变化,结果显示这些处理均可以明显降低CXCL-10的表达。接着,用VVestern blot分析D181对ERK、JNK、p38和STAT1通路活化的影响,发现其能够明显抑制ERK、JNK、p38和STAT1的磷酸化。 综上所述,我们首次发现小分子化合物D181能够通过调控TLR9通路抑制CpG引起的BMDCs的成熟和功能,并可以调控CXCL-10的表达,且主要通过MAPK和STA1信号通路发挥作用,这就提示我们D181可能会成为治疗CXCL-10相关疾病的潜在药物。
【关键词】：D181 树突状细胞 TLR9 CXCL-10
【学位授予单位】：南京大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R392;R329.2
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 目录9-12
• 缩略词表12-14
• 前言14-17
• 第一章 TLR9信号通路在树突状细胞参与的免疫调控中作用的研究进展17-23
• 1 树突状细胞的研究概况17-20
• 1.1 树突状细胞的生物学特性17-18
• 1.2 树突状细胞与疾病18-20
• 2 TLR9信号通路20-21
• 2.1 Toll样受体20
• 2.2 DCs中TLR9通路与疾病20-21
• 3 小分子化合物药用开发前景21-23
• 第二章 D181抑制TLR9配体诱导的炎性因子的产生23-33
• 1 引言23
• 2 实验材料与方法23-28
• 2.1 实验材料23-24
• 2.2 实验方法24-28
• 3 实验结果28-31
• 3.1 骨髓来髓DCs的诱导与鉴定28-29
• 3.2 D181不影响BMDCs活力29
• 3.3 D181不影响BMDCs凋亡29-30
• 3.4 D181抑制CpG诱导的BMDCs炎症因子的表达,其中CXCL-10变化尤为显著30-31
• 4 讨论31-33
• 第三章 D181抑制TLR9配体诱导的树突状细胞表型和功能的成熟33-39
• 1 引言33
• 2 实验材料与方法33-35
• 2.1 实验材料33-34
• 2.2 实验方法34-35
• 3 实验结果35-37
• 3.1 D181对CpG诱导的表面标志表达有抑制作用35-36
• 3.2 D181不影响BMDCs的吞噬36-37
• 4 讨论37-39
• 第四章 D181对TLR9通路中CXCL-10的调控机制39-48
• 1 引言39
• 2 实验材料与方法39-43
• 2.1 实验材料39-40
• 2.2 实验方法40-43
• 3 实验结果43-46
• 3.1 D181抑制CpG诱导BMDCs中CXCL-10的表达43
• 3.2 D181抑制BMDCs的趋化功能43-44
• 3.3 MAPK和STAT1通路调控CXCL-10的产生44-45
• 3.4 D181通过MAPK和STAT1抑制CXCL-10的产生45-46
• 4 讨论46-48
• 全文总结48-49
• 参考文献49-55
• 附录55-58
• 硕士期间科研成果58-59
• 致谢59-60

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5 陈敏;树突状细胞疫苗[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;2002年03期

6 张浩,郑树森,蒋国平,谢海洋;小鼠肝癌树突状细胞融合瘤苗促进肿瘤凋亡的实验研究[J];科技通报;2005年02期

7 张吉才,缪继武,杨宁;人外周血树突状细胞对LAK细胞杀伤活性的影响[J];免疫学杂志;1996年04期

8 邱立华;树突状细胞的研究近况[J];上海免疫学杂志;1999年02期

9 王晓,钱振超,裴雪涛;树突状细胞联合自杀基因tk及其效应的研究[J];中国肿瘤生物治疗杂志;1999年03期

10 刘欣,张学军,孙自敏,朱薇波;树突状细胞与抗肿瘤免疫[J];国外医学.肿瘤学分册;2000年06期

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1 刘修恒;;小鼠骨髓源性不同成熟度树突状细胞培养鉴定[A];第十七届全国泌尿外科学术会议论文汇编[C];2010年

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3 郭大伟;梁健;姜晓峰;王学范;魏云涛;姜洪磊;;GPC3基因转染的树突状细胞诱导抗肝癌HepG2细胞杀伤作用的研究[A];第十二届全国肝癌学术会议论文汇编[C];2009年

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5 于益芝;刘书逊;王文雅;张明徽;郭振红;徐红梅;齐润姿;安华章;曹雪涛;;TRAIL在树突状细胞杀伤活化T细胞中的作用[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年

6 尤长宣;罗荣城;张军一;苏瑾;廖旺军;郑航;Paul L Hermonat;;基因转移制备树突状细胞的实验研究[A];第一届中国肿瘤靶向治疗技术大会论文集[C];2003年

7 葛长勇;李鸿钧;孙茂盛;冯婷婷;靳昌忠;姚航平;吴南屏;;灭活SV40致敏的猴树突状细胞的生物学特性研究[A];2008年浙江省感染病、肝病学术年会论文汇编[C];2008年

8 葛长勇;李鸿钧;谢天宏;张光明;易山;孙茂盛;吴南屏;;恒河猴树突状细胞的生物学特性研究[A];中华医学会第四次全国艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全国热带病学术会议论文汇编[C];2009年

9 张尧;靳风烁;兰卫华;李彦峰;张克勤;吴刚;叶锦;;联合应用塞莱西布和CpG-ODN对树突状细胞功能的影响[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年

10 夏强;刘卫彬;陈振光;张莹;黄如训;;胸腺成熟树突状细胞与重症肌无力发生的相关性分析[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年

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4 孟冬梅;急性髓细胞白血病细胞来源的树突状细胞的诱导及功能研究[D];青岛大学;2003年

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8 郭佳;TLR配体诱导骨髓来源树突状细胞获得产生全反式维甲酸的能力[D];浙江大学;2011年

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10 董天庚;激动Toll样受体的树突状细胞肿瘤疫苗对小鼠结肠癌杀伤作用的实验研究[D];复旦大学;2010年

  本文关键词：D181调控TLR9信号影响DCs分泌CXCL-10的机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

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