乙肝治疗性DNA疫苗工程菌的建立和发酵培养基的初步优化

发布时间：2017-04-30 20:05

  本文关键词：乙肝治疗性DNA疫苗工程菌的建立和发酵培养基的初步优化，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：本研究室前期自主研发了基于塞姆利基森林病毒(SFV)的复制子DNA疫苗载体系统(称为可复制型DNA疫苗),已经应用于乙型肝炎、肿瘤等新型治疗性DNA疫苗的研究。可复制型DNA疫苗pSVK-HBVA是基于该系统构建的新型乙肝治疗性DNA疫苗,初步药效学实验显示：该疫苗能够诱导高效细胞免疫应答,降低转基因小鼠体内的HBV基因拷贝数,取得了较为良好的免疫效果。为了推进其进一步的深入研究,目前已经着手进行该疫苗中试工艺的建立。本研究的主要工作是筛选质粒pSVK-HBVA的最适宿主菌,并对携带pSVK-HBVA质粒的工程菌的发酵培养基进行初步优化。 首先,本研究进行了质粒pSVK-HBVA最适宿主菌的筛选。主要方法是：pSVK-HBVA质粒转化不同的感受态细胞,小量提取质粒,凝胶电泳检测质粒形态,通过连续传代法进行工程菌的稳定性检测。实验结果显示：大肠杆菌XL10-Gold为pSVK-HBVA的最适宿主菌。同时,按照2010版《中国药典》三部的要求建立了携带质粒pSVK-HBVA工程菌的三级种子批,并对种子批进行了分子生物学和生物化学等鉴定。 然后,本研究对该工程菌的发酵培养基进行了初步优化：(1)将工程菌在LB、TB、M9(葡萄糖)、M9(甘油)四种培养基中进行发酵培养,通过测定发酵菌体的干重和质粒浓度,分别计算质粒的容积产率和特异产率,选择该工程菌的基础发酵培养基。结果显示：LB作为基础培养基,能得到最高的质粒容积产率。(2)通过在基础发酵培养基中分别添加不同的碳源和氮源,比较各种碳源和氮源对发酵产率的影响。结果显示：0.5g/L的甘油作为碳源能得到较高的发酵产率,成本也较为低廉；10g/L的国产际蛋白胨代替OXOID公司的胰蛋白胨作为氮源能得到较高的发酵产率,也降低了成本。(3)在培养基中分别添加无机盐、盐酸硫胺素或微量元素进行发酵,研究它们对质粒产率的影响。实验结果显示：无机盐和微量元素的添加对质粒的产量有较为明显的提高,而盐酸硫胺素作用不明显。 综上,本研究对质粒DNA疫苗pSVK-HBVA的宿主菌进行了优化筛选,获得了能携带pSVK-HBVA的稳定传代30代的工程菌。通过对该工程菌的发酵培养基的筛选和优化,初步确定了既高产又经济的培养基成份,为对发酵培养基进行进一步的优化奠定了一定的实验基础。
【关键词】：质粒DNA疫苗 中试 宿主菌 发酵培养基
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 前言10-15
• 参考文献11-15
• 第一部分 pSVK-HBVA稳定宿主菌的筛选15-25
• 1.实验材料15-17
• 2.实验方法17-19
• 3.实验结果19-22
• 4.讨论22-23
• 5.参考文献23-25
• 第二部分 携带pSVK-HBVA质粒工程菌三级种子批的建立及鉴定25-37
• 1.实验材料25-27
• 2.实验方法27-32
• 3.实验结果32-34
• 4.讨论34-35
• 5.参考文献35-37
• 第三部分 工程菌E.coli HBVA发酵培养基的初步优化37-55
• 1.实验材料37-43
• 2.实验方法43-44
• 3.实验结果44-52
• 4.讨论52-54
• 5.参考文献54-55
• 总结55-56
• 致谢56-57
• 攻读学位期间发表的学术论文57-58
• 英文缩略词表58-59
• 综述59-68
• 参考文献65-68

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 郭妍;惠长野;;多表位HBV DNA疫苗的中试制备及质量研究[J];南方医科大学学报;2009年01期

2 何晓嫱 ,陈光明,黄英,杨富强,吴乐园,莫国玉;治疗型双质粒HBV DNA疫苗的构建及其鉴定[J];解放军医学杂志;2003年06期

3 王建设,朱启昒,张婷,俞蕙;粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子联合乙肝疫苗治疗宫内乙型肝炎病毒感染慢性携带儿童的研究(英文)[J];Chinese Medical Journal;2002年12期

  本文关键词：乙肝治疗性DNA疫苗工程菌的建立和发酵培养基的初步优化，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：337479