P13Kp85、p-Akt在人血管瘤裸鼠移植模型中的表达及调控

发布时间：2017-04-30 20:20

  本文关键词：P13Kp85、p-Akt在人血管瘤裸鼠移植模型中的表达及调控，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：观察磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B (Akt)在人血管瘤裸鼠移植模型中的表达,并对其进行药物干预,探讨PI3K/Akt信号通路在小儿血管瘤的发生、发展及消退过程中的作用。 方法：选用3-4周大小的裸小鼠18只,雌雄不拘,体重17.0-22.0g,将手术切除的1例1岁3月龄女婴左胸部增生期毛细血管瘤制成组织块,转种于裸小鼠双侧腋下、颈部、腰背部、腹股沟处,每只6处,共108处。生长45天后,将移植成功标本随机分成：①对照组：每个瘤体内注射生理盐水0.05ml。②干预组分四组：a组：每个瘤体内注射0.5umol/L的胰岛素样生长因子0.05ml；b组：每个瘤体内注25μmol/L的LY2940020.05ml；c组：每个瘤体内注射10nmol/L的雷帕霉素0.05ml；d组：每个瘤体内注射糖皮质激素(1g/L的曲安缩松)0.05ml。于药物注射当日(用药前)、注射后3日、1周、2周肉眼大体观察移植瘤形态变化,光镜观察移植瘤组织结构变化,免疫组化检测PI3Kp85、p-Akt蛋白的分布及表达情况,RT-PCR检测p-Akt mRNA的表达情况。 结果： 1.裸鼠及移植瘤存活情况：饲养60天,所有裸鼠均存活。成瘤率为76.77%(83/108),移植瘤在移植前30天内均不同程度的缩小,30天后开始缓慢生长,移植45天到60天之间生长迅速。 2.大体形态学观察：用药前到用药后两周内,对照组移植瘤体积逐渐增大,质软,颜色逐渐变红；胰岛素生长因子组移植瘤生长较快,体积增大明显,质软,于皮外观察呈紫蓝色；LY294002、雷帕霉素、曲安奈德组移植瘤逐渐停止生长,体积逐渐变小,质软,颜色逐渐发白。 3.组织病理学表现：对照组及胰岛素样生长因子组较用药前血管瘤细胞团界限清楚,细胞核大、染色深,细胞间质和血管内皮细胞都增多,并可见微血管。其中胰岛素生长因子组毛细血管管腔密集,有血窦生成,内可见红细胞。LY294002、雷帕霉素、曲安奈德组血管瘤细胞核较小呈固缩状,染色浅间隔组织多,并呈现空泡状,无明显的血管腔样结构,多被纤维结缔组织和脂肪组织替代。 4.免疫组化结果：LY294002、雷帕霉素、曲安奈德组PI3K p85阳性表达率分别为80%,80%及86.67%,p-Akt阳性表达率分别为86.67%,73.33%及80%。对照组及胰岛素生长因子组P13K p85及p-Akt阳性表达率均为100%。用药3天后,雷帕霉素组p85及p-Akt蛋白的IOD值分别为p85(83.172±10.76)、p-Akt(79.578±11.745),较对照组p85(143.584±26.954)、p-Akt(111.776±10.916)下降,差异有统计学意义(P＜0.05)。用药一周后LY294002、雷帕霉素、曲安奈德p85及p-Akt蛋白的IOD值分别为p85(81.042±11.451)/p-Akt(65.99±6.313)、p85(93.784±17.345)/p-Akt(72.096±18.01)、(89.6±19.719)/p-Akt(82.566±15.268),较对照组p85(135.396±31.714)/p-Akt(115.096±19.595)下降,差异有统计学意义P0.05),用药一周后,胰岛素样生长因子组p85及p-Akt蛋白的IOD值为p85(169.178±7.765)/p-Akt(145.054±12.631),较对照组p85(135.396±31.714)/p-Akt(115.096±19.595)升高,差异有统计学意义(P＜0.05)。用药两周后,雷帕霉素、LY294002、曲安奈德p85及p-Akt蛋白的IOD值分别为p85(58.684±20.057)/p-Akt(49.596±14.186)、p85(58.788±20.314)/p-Akt(55.698±12.744)、 p85(64.594±25.911)/p-Akt(64.078±20.922),表达较对照组p85(145.374±26.125)/p-Akt(115.498±19.381)下降,差异具有显著性(P＜0.01);用药两周后,胰岛素样生长因子p85及p-Akt蛋白的IOD值为p85(179.322±20.893)/p-Akt(162.43±13.409),表达较对照组p85(145.374±26.125)/p-Akt(115.498±19.381)增高,差异有统计学意义(P＜0.05)。 5. Rt-PCR结果：用药3天后,LY294002、雷帕霉素、曲安奈德组p85及p-Akt蛋白的mRNA表达值分别为p85(0.04±0.014)/p-Akt(0.058±0.017)、p85(0.039±0.01)/p-Akt (0.059±0.011)、p85(0.042±0.012)/p-Akt(0.053±0.021),较对照组p85(0.077±0.011)/p-Akt(0.121±0.031)下降,差异具有显著性(P＜0.01)。用药一周后,雷帕霉素、LY294002、曲安奈德p85及p-Akt蛋白的IOD值分别为p85(0.034±0.012)/p-Akt(0.028±0.011)、 p85(0.029±0.012)/p-Akt(0.043±0.018)、p85(0.027±0.007)/p-Akt(0.046±0.016),较对照组p85(0.085±0.025)/p-Akt(0.12±0.03)下降,差异有统计学意义(P＜0.05)),用药一周后,胰岛素样生长因子组p85及p-Akt蛋白的IOD值为p85(0.131±0.042)/p-Akt(0.238±0.082),较对照组p85(0.085±0.025)/p-Akt(0.12±0.03)升高,差异有统计学意义(P＜0.05)。用药两周后,雷帕霉素、LY294002、曲安奈德p85及p-Akt蛋白的IOD值分别为p85(0.026±0.008)/p-Akt(0.028±0.009)、p85(0.025±0.009)/p-Akt(0.027±0.009)、p85(0.022±0.009)/p-Akt(0.027±0.01),表达较对照组p85(0.096±0.014)/p-Akt(0.134±0.039)下降,差异有统计学意义(P＜0.05)；用药两周后,胰岛素样生长因子p85及p-Akt蛋白的IOD值为p85(0.188±0.066)/p-Akt(0.309±0.105),表达较对照组p85(0.096±0.014)/p-Akt(0.134±0.039)增高,差异具有显著性(P＜0.01)。 结论： 1.人血管瘤裸鼠移植模型中血管瘤内皮细胞中有PI3Kp85、p-Akt表达。 2. PI3K/Akt信号通路可能参与人血管瘤裸鼠移植模型血管瘤内皮细胞凋亡的调控。 3.LY294002、雷帕霉素、曲安奈德及胰岛素样生长因子可能通过干预PI3K/Akt信号通路中相应的靶点,抑制或激活PI3K/Akt信号通路来促使瘤体消退及增生。
【关键词】：血管瘤 移植模型/裸鼠 p85 p-Akt 调控
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R725.4;R-332
【目录】：

• 英文缩略词表3-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-12
• 前言12-14
• 材料与方法14-23
• 结果23-35
• 讨论35-38
• 结论38-39
• 参考文献39-41
• 综述：PI3/Akt信号转导通路与血管瘤41-48
• 参考文献46-48
• 致谢48-49
• 作者简介49

【参考文献】

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1 岳文涛;王小敏;王s，

本文编号：337514