应用siRNA技术抑制产肠毒素大肠杆菌LT基因表达的研究

发布时间：2017-05-04 17:11

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【摘要】：目的应用小干扰RNA(siRNA)技术抑制产肠毒素大肠杆菌(ETEC)LT基因的表达。方法针对LT基因设计siRNAs序列,在ETEC培养过程中,将针对LT的siRNA、非特异性对照siRNA、阴性对照siRNA和LB培养基分别加入siRNA组(siRNA-LT1组、siRNA-LT2组)、siRNA-coa3组、siRNA-NC组和空白对照组,分3个时间点加入,每次1nmol。在首次加入siRNA后45min(A时间点)、90min(B时间点)、135min(C时间点)留取菌液,应用实时荧光定量PCR检测上述3个时间点5组LT mRNA的表达水平。应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测siRNA-LT1组、siRNA-LT2组和空白对照组在3个时间点的LT蛋白表达水平。结果实时荧光定量PCR结果显示,siRNA-LT1在A、B、C 3个时间点对LT mRNA表达的抑制率分别为70.9%、70.1%、72.5%,siRNA-LT2在A、B、C 3个时间点对LT mRNA表达的抑制率分别为70.1%、69.2%、70.5%,siRNALT1组、siRNA-LT2组对LT mRNA表达的抑制率与相应处理时间的siRNA-NC组、siRNA-coa3组、空白对照组比较差异均有统计学意义(P0.05)。Western Blot结果显示,siRNA-LT1和siRNA-LT2在A、B、C 3个时间点对LT蛋白表达的抑制率分别为43.1%、18.4%、5.0%和38.2%、15.4%、30.1%。结论针对LT基因设计合成的siRNA在体外能有效地抑制LT基因的表达。
【作者单位】： 昆明医科大学第一附属医院检验科;
【关键词】： 产肠毒素大肠杆菌 不耐热肠毒素 小干扰RNA技术 RNA干扰
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81460322) 云南省内设研究机构科技计划项目(2011WS0048)
【分类号】：R440
【正文快照】： 产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是一种致病型的大肠埃希菌,全球每年因感染ETEC发生腹泻的人数约为6.5亿[1],在发展中国家,5岁以下儿童每年因感染ETEC发生腹泻的人数约为2.1亿,其中约有38万因该疾病死亡[2]。目前,临床治疗ETEC感染性腹泻的主要方法是应用抗菌药物及补液。但随着抗菌药

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 汤瑾;蒋燕群;;KPC酶在肺炎克雷伯菌碳青霉烯类耐药中的研究[J];检验医学;2010年12期

2 严燕国;詹文华;赵刚;马晋平;蔡世荣;;CagA对幽门螺杆菌诱导胃黏膜上皮细胞分泌IL-8水平的影响[J];中国病理生理杂志;2006年04期

3 ;Effect of siRNAs on HSV-1 Plaque Formation and Relative Expression Levels of RR mRNA[J];Virologica Sinica;2011年01期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 陈少芳;彭孝纬;;消化性溃疡发病的分子机制及中医药治疗探讨[J];福建中医学院学报;2007年01期

2 王琳琳;唐清;梁淡湄;姜海行;陆红;;儿童幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A检测的意义[J];实用儿科临床杂志;2006年19期

3 刘雄;张凤娇;李享;陈芳红;房华丽;王琴;李涛;王慧;;KPC-2型碳青霉烯酶的表达纯化及其催化抗生素水解的动力学[J];生物技术通讯;2013年05期

4 赵刚;严燕国;马晋平;彭俊生;董文广;蔡世荣;何裕隆;詹文华;;siRNA电转化幽门螺杆菌抑制空泡毒素基因mRNA表达[J];中国病理生理杂志;2007年11期

5 邵圣文;张志智;顾红光;王文琴;;RNA干扰铜绿假单胞菌群体感应系统对生物膜影响的研究[J];中国抗生素杂志;2009年03期

6 张强;薄惠;邢建华;王高峰;;单纯疱疹病毒Ⅱ型ICP22真核表达载体的构建及其对Vero细胞活性的影响[J];现代预防医学;2014年22期

中国博士学位论文全文数据库 前3条

1 张锐;稳定表达靶向HSV2 VP16 shRNA重组细胞系的建立及其对HSV2复制能力影响研究[D];郑州大学;2012年

2 王欣莹;问号钩端螺旋体鞭毛相关基因flhA、flhB和fliR突变株的构建及其功能的初步研究[D];吉林大学;2006年

3 许彦梅;肠出血性大肠杆菌O157:H7 EDL933基因组岛OI-172的功能研究[D];中国疾病预防控制中心;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前4条

1 吴昊;靶向siRNA抑制金黄色葡萄球菌coa基因表达的研究[D];昆明医科大学;2012年

2 付瑞;应用siRNA技术抑制产肠毒素大肠杆菌LT基因表达的研究[D];昆明医科大学;2013年

3 张奉莲;靶向siRNA体外抑制大鼠肾间质成纤维细胞MAS基因表达的研究[D];泸州医学院;2013年

4 丁厚康;兔大肠杆菌病对血液指标和实质器官的影响探讨[D];山东农业大学;2013年

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王锡琪;俞守义;张慧;杨先安;;应用大肠杆菌LT基因探针检测几种肠道菌LT的初步研究[J];中国公共卫生;1987年05期

2 王锡琪;俞守义;张慧;杨先安;;应用大肠杆菌LT基因探针检测几种肠道菌LT的初步研究[J];广后医学;1988年01期

3 赵汉良;李景禧;王晓春;明建国;于美玲;;LT基因探针检测毒素大肠杆菌的报告[J];中国公共卫生学报;1990年06期

4 ;[J];;年期

5 ;[J];;年期

6 ;[J];;年期

7 ;[J];;年期

8 ;[J];;年期

9 ;[J];;年期

10 ;[J];;年期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 付瑞;应用siRNA技术抑制产肠毒素大肠杆菌LT基因表达的研究[D];昆明医科大学;2013年

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本文编号：345474