bFGF基因转染成骨细胞的生物学性质及成骨研究

发布时间：2021-10-26 05:03

　　许多研究结果表明碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）直接与成骨细胞联合植入体内能明显促进骨形成过程，这对临床治疗骨折、骨缺损、骨坏死等骨科疾病有一定的效果。但是bFGF在体内易降解，因此bFGF和成骨细胞联合植入时直接外源给予bFGF需反复多次注射，造成使用不方便、易感染，而且bFGF浓度不易控制，影响疗效。因此本课题设计基因治疗与骨组织工程学相结合的方法以改变外源性加入bFGF蛋白的不足之处，即将成骨细胞经bFGF基因转染后进行体外扩增，并进一步研究其体内外成骨能力，得出如下结果： 应用PCR技术从克隆载体PBR322-bFGF载体上扩增获得bFGF cDNA基因，采用基因重组技术将bFGF cDNA克隆至真核表达载体pcDNA3.1和pEGFP-C3上。重组质粒分别经双酶切、PCR分析及序列测定验证了插入片段的正确性后，用脂质体介导重组质粒pcDNA3.1-bFGF和pEGFP-C3-bFGF转染3T3细胞。荧光显微镜观察转染细胞的荧光表达情况，细胞爬片免疫组化以及细胞培养上清的ELISA检测bFGF表达情况。结果表... 

【文章来源】：华南理工大学广东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：114 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

制备组织工程产品的一般步骤〔引Fig.1一1ProeessofPreParationTissueEngineeringProduets

组织工程一样即:种子细胞、生物载体材料以及调节信号因子。随着细胞生物学、材料科学以及分子生物学的发展，骨组织工程学在种子细胞、材料支架、调节信号因子方面取得一定的进展。图1一3是骨组织工程移植原理图「，91:图1一3骨组织工程体内移植的原理图Fig.1一3DiagramofPrineiPleofBoneTissueinvivotransPlant1.2.1种子细胞一一成骨细胞的研究现状骨组织工程学研究中效应细胞可用未分化间充质细胞或成骨细胞，间充质细胞为多功能分化潜能细胞，必须在BMP诱导下才能向成骨方向分化，而成骨细胞因其本身已有向成骨方向分化的潜能，故不用BMP诱导;而且间充质细胞主要来源于骨髓，成骨细胞来源于骨膜、骨组织，因为成年动物骨髓中间充质细胞数量随年龄的增大而明显减少，故骨组织工程学研究常采用培养成骨细胞作为种子细胞〔2。〕。1.2.1.1成骨细胞的形态和生化特点在生长活跃的骨组织内大致可分辨出四种细胞成分

图1一5脂质体介导基因转移原理图〔10，，Fig.1一5PrineiPleofLIPosome一mediatedGeneTransefr响阳离子脂质体转基因的因素子脂质体转基因的效率主要与阳离子脂质体的组成、脂质与基因

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3458884