吉兰—巴雷综合征源空肠弯曲菌致周围神经病Hartley豚鼠模型建立

发布时间：2017-05-05 15:10

  本文关键词：吉兰—巴雷综合征源空肠弯曲菌致周围神经病Hartley豚鼠模型建立，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：建立吉兰-巴雷综合征源空肠弯曲菌感染致周围神经病Hartley豚鼠模型，为进一步探讨以空肠弯曲菌为感染源，经胃肠道自然感染，引起继发性免疫相关性疾病的发病模式，为研究吉兰-巴雷综合征的感染途径，发病机制及其神经病理奠定研究模型基础。 方法： 1.培养空肠弯曲菌：选取河北医科大学第二医院神经病学实验室-80℃冰箱保存的吉兰-巴雷综合征（Guillain-Barre syndrome, GBS）患者分离培养出的空肠弯曲菌菌株lulei株，室温溶化后取100ul菌液加入到含5ml布氏肉汤培养基的无菌西林瓶内，置于三气培养箱，42℃微需氧（10%CO2、5%O2、85%N2）培养24小时。传代至含7%无菌脱纤维羊血的哥伦比亚血平板培养基，相同条件培养24小时，纯化后制备菌悬液。 2.鉴定空肠弯曲菌：革兰染色、过氧化物试验、马尿酸水解试验。 3.实验动物分组：采用4-6周龄，体重为250-300g，雌雄各半的SPF级健康Hartley豚鼠48只,随机分为实验组36只和对照组(D组)12只，实验组分为活菌灌喂组(A组)、死菌灌喂组(B组)、免疫灌喂组(C组)，每组各12只。 4.给菌途径及浓度：实验组动物均经口服灌喂3×108cfu/ml菌悬液2ml；对照组动物口服灌喂生理盐水2ml，灌喂前均禁食12小时不禁水，灌胃后即给食水。 5.实验动物观察：自灌喂当日起每日观察Hartley豚鼠的临床症状：饮食、大便，体重及肢体活动等情况。 6.粪便培养:各组实验动物均于灌喂前，灌喂24小时后连续粪便培养、分离空肠弯曲菌。 7.解剖实验动物：称重后用4%水合氯醛(10ul/g)腹腔注射麻醉动物，常规皮肤消毒后打开胸腔，暴露心脏后以4%多聚甲醛灌注泵灌注，灌注后取双侧坐骨神经，臂丛神经，脑，，脊髓组织，所有组织均用4%多聚甲醛固定24小时后二次取材进行神经病理检查，实验结束交予河北神经病学实验室统一处理实验动物。 8.神经病理检查：采用HE染色，免疫组化，锇酸染色观察神经病变。 结果： 1.临床观察：实验动物A3组（连续攻毒4周），A4组(连续攻毒5周)各有一只出现活动减少，食欲减退，体重减轻症状，占总数的5.6%（2/36）；余实验组和对照组动物未出现明显临床症状。 2.周围神经病变： 活菌灌喂组（A组）：显示连续灌喂2周，3周，4周各分组中3只豚鼠周围神经均出现病理改变，表现为HE染色可见神经纤维结构多样，轴索肿胀。免疫组织化学染色：鼠抗人神经细丝蛋白单克隆抗体示：神经丝粗细不等，节段性萎缩；兔抗人髓磷脂碱性蛋白：髓鞘厚度均一，未见脱髓鞘样改变。锇酸染色：可见神经皱缩、髓鞘塌陷。连续灌喂5次分组中有一只出现上述病理改变，余两只HE染色示正常神经纤维结构，未见明显病理改变。 死菌灌喂组（B组）：各组实验动物神经病理染色未见明显改变。 免疫灌喂组（C组）：再次免疫2周，3周实验组中各有一只出现上述病理改变，再免4周组中3只全部出现病理改变，余未出明显病理改变。 空白对照组（D组）：各组实验动物神经病理染色未见明显改变。 3.粪便培养：各组实验动物于实验前粪便培养空肠弯曲菌均为阴性；A组实验动物于灌喂后24小时连续每天粪便培养可见空肠弯曲菌，余各组实验动物灌喂后24小时培养空肠弯曲菌为阴性。 结论： 1.SPF级健康Hartley豚鼠胃肠道内无空肠弯曲菌。 2.吉兰-巴雷综合征源空肠弯曲菌口服灌喂感染Hartley豚鼠可导致周围神经病。活菌灌喂组优于免疫灌喂组，单纯死菌灌喂Hartley豚鼠不导致周围神经病。Hartley豚鼠可以作为吉兰巴雷综合症的研究模型动物。
【关键词】：空肠弯曲菌 周围神经病 吉兰-巴雷综合征 Hartley 豚鼠 动物模型
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R-332;R745.43
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 前言9
• 材料与方法9-18
• 结果18-20
• 附图20-24
• 讨论24-26
• 结论26
• 参考文献26-28
• 综述 吉兰-巴雷综合征的研究进展28-37
• 参考文献35-37
• 致谢37-38
• 个人简历38

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

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本文编号：346574