H1N1亚型流感病毒Vero细胞冷适应株的选育及甲型流感病毒Vero细胞适应株的ELISA检测

发布时间：2017-05-05 22:05

  本文关键词：H1N1亚型流感病毒Vero细胞冷适应株的选育及甲型流感病毒Vero细胞适应株的ELISA检测，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：流感病毒减毒活疫苗采用滴鼻途径免疫,能激发机体的细胞免疫、体液免疫和黏膜免疫,具有减免注射疼痛,免疫保护作用持久,有一定的交叉保护作用等优点。目前上市的流感病毒减毒活疫苗是以鸡胚为培养基质生产的。然而,使用鸡胚生产流感疫苗还存在着许多不足：遗传性状稳定性差,降低了保护效果；交叉保护作用差；容易被其他致病因子所污染；纯化工艺复杂；难以大规模生产等。Vero细胞是WHO推荐用于疫苗生产的细胞基质,用其培养的流感病毒遗传稳定性好,质量更高,还可实现规模化生产以满足流感大流行的需要。 流感病毒Vero细胞冷适应株是用流感病毒Vero细胞适应株通过在低温下连续传代培养选育而出。本实验通过温度梯度降温法成功选育出了一株能在25℃生长的H1N1亚型流感病毒冷适应株,血凝效价维持在1：512以上。对该毒株在低温培养时的PH值、TPCK胰酶的添加、BSA终浓度等条件进行了优化,并确定了病毒的适宜收获时间。通过免疫荧光、血凝抑制试验以及感染性滴度测定对该毒株的生物学性状进行了鉴定。实验结果表明该毒株与H1N1亚型Vero细胞适应株为同一亚型。通过对该毒株在25℃、33℃、39℃的TCID50ml-2的比较,确定该毒株具有ts表型和ca表型。通过RT-PCR扩增出该株流感病毒的8个基因片段,并将NA、NS、NP、M四个基因成功连接到双向转录载体PHW2000上,并进行基因测序分析。通过与对应母本株基因的比对,确定了突变位点,为流感病毒冷适应的相关基因研究奠定了基础。 为了便于Vero细胞冷适应株的选育,通过测定包被抗体、第二抗体和酶标抗体最佳工作浓度,建立了双抗体夹心ELISA检测甲型流感病毒Vero细胞适应株病毒的方法。对已知的阳性样品,双抗体夹心ELISA法测定的病毒滴度比血凝方法测定病毒滴度灵敏度高。该方法操作简单、敏感性高,可应用于流感病毒的检测。
【关键词】：Vero细胞 流感病毒 冷适应 ELISA
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R373.13
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-7
• 第一部分 H1N1亚型流感病毒Vero细胞冷适应株的选育7-36
• 前言7-10
• 一、实验材料10-12
• 二、实验方法12-19
• 三、结果与分析19-28
• 四、讨论28-32
• 五、小结32-33
• 参考文献33-36
• 第二部分 甲型流感病毒Vero细胞适应株的ELISA法检测36-46
• 前言36
• 一、实验材料36-37
• 二、实验方法37-39
• 三、结果和分析39-42
• 四、讨论42-43
• 五、小结43-44
• 参考文献44-46
• 附录46-67
• 致谢67-68
• 个人简历68-69

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 吴少慧;舒跃龙;;Vero细胞流感疫苗应用前景[J];病毒学报;2006年01期

2 马鑫;郑玉建;;流感病毒变异及流感监测技术[J];疾病监测;2008年08期

3 张英伟;李卫东;马娜;姚忠萍;燕景恩;张勇;刘雅灵;杨佳;吴忠香;廖国阳;杨净思;李长贵;;以重配技术制备H1N1流感病毒Vero细胞适应株[J];中国生物制品学杂志;2009年06期

4 殷建文;焦龙;甄祖刚;刘苗苗;赵新;吴栩涛;王立刚;万艾玲;盖小群;周荔葆;;Vero细胞制备流感病毒疫苗[J];中国生物制品学杂志;2009年10期

5 张德礼,李六金,夏耕田,何旭玉,高步先,白晓鸿,黄高升,刘尚高,阎隆飞,方福德;犬肾细胞系的染色体组型分析与致癌/致瘤性的实验研究[J];中国农业科学;2002年05期

6 伍林柏;黄成军;程书权;;流行性感冒病毒疫苗的发展和研究现状[J];中华临床医师杂志(电子版);2012年13期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 张英伟;重配制备H1N1流感病毒Vero细胞适应株[D];中国协和医科大学;2009年

  本文关键词：H1N1亚型流感病毒Vero细胞冷适应株的选育及甲型流感病毒Vero细胞适应株的ELISA检测，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：347139