乙型肝炎病毒包膜M蛋白的表达与免疫原性研究

发布时间：2021-11-06 08:59

　　乙肝病毒（HBV）包膜蛋白由3个区域组成：与肝细胞直接作用的含有108或119个氨基酸残基的preS1，通过多聚白蛋白间接与之作用的含有55个氨基酸残基的preS2区域，和含有226个氨基酸残基的S蛋白区。许多研究证明，带有preS1和preS2序列的乙肝表面抗原（HBsAg）有望成为新一代更高效的乙肝疫苗。巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）是近年兴起的一个重组蛋白生产系统，以其独特的优势在生物工程应用中不断得到推广。本论文就HBV包膜M蛋白在原核大肠杆菌（E．coli）和真核Pichia系统的表达、性质鉴定及免疫原性等进行了系统详细的研究。 在原核系统中表达preS2多肽，为HBV包膜M蛋白的活性检测提供材料。将人工合成preS2的全基因插入E．coli表达载体pThioHisA，以硫氧还蛋白融合蛋白的形式实现高效表达。经渗透压处理初步纯化蛋白，获得了具有preS2抗原性的thioredoxin-preS2融合蛋白。 为了在Pichia系统中高效表达HBV包膜M蛋白，用限制性内切酶SacI+SalI消化质粒pPIC3.5k和pAO815，替换对等部分，组成新... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：133 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

persZpeR扩增结果

(185bP)·(二)、重组质粒pThi0HsiA一perZS的构建及序列分析酶切鉴定(图1.3)及DNA测序结果(图1.4)表明，pThioHisA一preSZ构建正确，persZ基因序列与预期的一致。

pThofHiAs·persZ在大肠杆菌B卜21D(E3)中不同诱导onofPThioHiAs·PerSZin.EeoliBL·21(DE3)atdieffrentlarweihgtstnaddar(middlenarge);1.CelllysateofBLZlysateofBLZIP/ThioHiAs一PreSZ2hoursatferIPTGinerSZ4housr峨erIPTGinduetion:4.CelllysateofBLZn;5.CelllyasteofBLZI/PThioHisA一PreSZ8hoursatfioHiAs·PreSZ8hoursatferuninduetion·重组蛋白的初步纯化经过20%蔗糖渗透压处理后，基本上分子量为19KD的presZ融合表达蛋白，粒p珑。HisA的表达产物htoierdxoni存在于处理液上清中的含量有38%(

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3479546