SD乳鼠髁突软骨细胞和鼻中隔软骨细胞生物学特性的比较研究

发布时间：2017-05-06 20:01

  本文关键词：SD乳鼠髁突软骨细胞和鼻中隔软骨细胞生物学特性的比较研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：[目的]建立SD乳鼠髁突软骨细胞(mandibular condylar chondrocyte,mcc)和鼻中隔软骨细胞(nasal septal chondrocyte, nsc)原代培养模型,观察髁突软骨细胞和鼻中隔软骨细胞生物学特性的差异,为探讨髁突软骨和鼻中隔软骨的形成过程和在颌面部生长发育中的作用机制提供理论基础。 [方法]用机械分离和酶联消化法将出生1-3天SD乳鼠的髁突软骨细胞和鼻中隔软骨细胞在相同培养条件下进行原代培养,分别在培养第3天、5天、8天、15天在倒置显微镜下观察细胞形态及生长状况。Ⅱ型胶原免疫组化染色和甲苯胺蓝染色鉴定软骨细胞并观察两种软骨细胞外基质的合成。噻唑蓝(methyl hiazolyl tetraxolium, MTT)比色法绘制两种细胞的生长曲线。划痕实验观察两种细胞划痕24h后细胞迁移的能力。实时荧光定量PCR (real time quantitative polymerase chain reaction, RT-PCR)方法检测上述四个时间点软骨细胞外基质中Ⅱ型胶原(type Ⅱ collagen, Col Ⅱ)和聚集蛋白多糖(aggrecan, AGG) mRNA的表达。 [结果]采用相同的消化方式及培养条件成功培养出原代髁突软骨细胞和鼻中隔软骨细胞,其形态学和生物学特性均符合软骨细胞特性。两种软骨细胞在第5天、8天、15天时进行Ⅱ型胶原免疫组化染色和甲苯胺蓝染色,染色结果均呈阳性,证实培养的细胞为所需的软骨细胞。两种软骨细胞染色阳性率分别随培养天数增加而逐渐增强；相同时间点,两种染色中鼻中隔软骨细胞阳性表达均高于髁突软骨细胞。MTT比色法检测出两种软骨细胞的生长曲线基本一致,鼻中隔软骨细胞的增殖能力较髁突软骨细胞强。两种软骨细胞划痕后24h观察到鼻中隔软骨细胞迁移至划痕处的数量明显较髁突软骨细胞多,说明鼻中隔软骨细胞的迁移能力强于髁突软骨细胞。两种软骨细胞在培养第3天、5天、8天、15天时对细胞外基质中的Ⅱ型胶原和aggrecan mRNA的表达进行检测,发现两种软骨细胞Ⅱ型胶原和aggrecan mRNA的表达量在前三个时间点均随细胞培养时间的增加而增高,第15天时Ⅱ型胶原、aggrecan mRNA的表达量下降；相同时间点鼻中隔软骨细胞合成Ⅱ型胶原、aggrecan的能力均高于髁突软骨细胞。 [结论]1.本实验采用相同的消化方式及培养条件成功建立了SD乳鼠髁突软骨细胞和鼻中隔软骨细胞的原代培养模型；2.鼻中隔软骨细胞的增殖和迁移能力均强于髁突软骨细胞；3.髁突软骨细胞和鼻中隔软骨细胞Ⅱ型胶原和aggrecan mRNA的表达变化与体内胚胎期软骨形成过程中Ⅱ型胶原和aggrecan mRNA的表达变化基本一致,鼻中隔软骨细胞Ⅱ型胶原和aggrecan的表达量多于髁突软骨细胞,提示这两种软骨细胞外基质的差异是导致两种软骨的功能特性及对局部生物力学的反应不同的原因之一。髁突软骨细胞和鼻中隔软骨细胞在增殖、迁移以及细胞外基质表达方面均存在差异,这些可能与髁突软骨和鼻中隔软骨形成机制和生长特性的不同密切相关。
【关键词】：髁突软骨细胞 鼻中隔软骨细胞 软骨形成 生物学特性
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 英文缩写词表5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 引言10-13
• 第一部分 SD乳鼠髁突软骨细胞和鼻中隔软骨细胞的原代培养与鉴定13-27
• 材料13-14
• 方法14-16
• 结果16-23
• 讨论23-26
• 结论26-27
• 第二部分 SD乳鼠髁突软骨细胞和鼻中隔软骨细胞的增殖和迁移27-33
• 材料27-28
• 方法28-29
• 结果29-31
• 讨论31-32
• 结论32-33
• 第三部分 SD乳鼠髁突软骨细胞和鼻中隔软骨细胞Ⅱ型胶原、Aggrecan的表达差异33-44
• 材料34-35
• 方法35-38
• 结果38-41
• 讨论41-43
• 结论43-44
• 全文总结44-45
• 参考文献45-49
• 文献综述49-58
• 参考文献54-58
• 发表文章58-59
• 致谢59-60
• 病例展示60-79

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 李舰;许艳华;;鼻中隔软骨组织工程中细胞外基质的研究[J];国际病理科学与临床杂志;2013年02期

中国硕士学位论文全文数据库 前4条

1 鲁艳平;HGF、ERK/MAPK、ESM和CNTF信号通路在大鼠肝再生中对肝细胞分化的调节作用研究[D];河南师范大学;2013年

2 龚明福;GoldMag纳米粒对HUVECs生物活性影响及体外MR成像研究[D];第三军医大学;2013年

3 陈开杰;姜黄素衍生物C086抗肿瘤转移作用及对裸鼠移植瘤生长的影响[D];福建医科大学;2013年

4 杨磊;ELMO2在肝癌细胞迁移运动和侵袭中的功能[D];天津医科大学;2013年

  本文关键词：SD乳鼠髁突软骨细胞和鼻中隔软骨细胞生物学特性的比较研究，由笔耕文化传播整理发布。

，

本文编号：349018