Nischarin蛋白及其下游信号分子在大鼠脑发育过程中的表达及意义

发布时间：2017-05-06 20:10

  本文关键词：Nischarin蛋白及其下游信号分子在大鼠脑发育过程中的表达及意义，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：脑发育过程中,长期精确的发育调控过程形成了脑独特的构造.Nischarin是近年来发现的一种新型蛋白。在现阶段,关于Nischarin的研究主要集中在抑制肿瘤细胞迁移、侵袭等功能,然而对于Nischarin在神经系统中所起作用方面的研究较少。活化激酶(P21-activated kinases, PAK)和LIM激酶(LIM kinases, LIMK)是Rho-GTPases家族的下游分子,对神经系统的功能有重要影响。有研究发现,Nischarin可以抑制PAKl和LIMK1的活性,并且通过Rho GTPase信号通路引发骨架蛋白重组,从而抑制肿瘤细胞迁移。近期研究还发现,Nischarin在大鼠脑组织中高度表达,并且在脑区的分布呈现区域化。探索脑正常发育过程的分子机制,对于神经系统相关疾病的诊断和治疗具有重要的意义。本实验研究Nischarin及其下游PAK, LIMK、confilin在大鼠脑发育过程中的变化及其意义。方法：采用western blot、荧光定量RT-PCR技术检测在鼠胚胎及出生后不同发育时间脑组织中Nischarin表达、PAK磷酸化、LIMK磷酸化及cofilin磷酸化水平的改变；免疫共沉淀等技术研究大脑皮层中Nischarin与PAK以及LIMK的互作关系；在Neuro-2a(小鼠脑神经瘤细胞)细胞上研究Nischarin磷酸化调控PAK、LIMK、cofilin的机制；通过细胞划痕技术研究PC-12(肾上腺嗜铬细胞瘤)细胞上Nischarin对细胞迁移能力的影响。结果：1)Nischarin的蛋白和mRNA水平在大鼠脑皮层、海马和小脑中,呈现发育第四周增高的趋势；2)PAK蛋白的磷酸化水平在大鼠脑皮层和海马发育过程中,在出生后14天至28天呈现减少的趋势；3)LIMK蛋白的磷酸化水平在大鼠脑皮层和海马发育过程中,在出生后14天至28天随发育进程呈现减少的趋势；LIMK蛋白的磷酸化水平在大鼠小脑发育过程中,在出生后14天与28天下降；4)cofilin蛋白的磷酸化水平在大鼠脑皮层和海马发育过程中,在出生后21天到28天磷酸化水平下降；5)大鼠大脑皮层中,存在PAK和Nischarin的稳定结合以及LIMK和Nischarin的稳定结合；6)Neuro-2a细胞上,Nischarin对PAK的磷酸化有直接抑制作用,但不能直接抑制LIMK和cofilin的磷酸化；7)在体外培养的神经细胞PC-12上Nischarin可抑制其迁移能力。结论：通过实验我们认为Nischarin可能通过调控PAK及其下游LIMK和cofilin蛋白的磷酸化以及调节神经元的迁移,参与大鼠脑的正常发育过程。
【关键词】：Nischarin 脑发育 磷酸化调控 Rho GTPases
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392
【目录】：

• 致谢4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 缩写、符号清单、术语9-10
• 目次10-11
• 1 引言11-15
• 2 材料和方法15-27
• 2.1 实验材料15-19
• 2.2 实验方法19-27
• 3 实验结果27-45
• 3.1 Nischarin在脑发育不同阶段的动态表达27-32
• 3.2 PAK蛋白的磷酸化水平在脑发育不同阶段的动态变化32-34
• 3.3 LIMK蛋白的磷酸化水平在脑发育不同阶段的动态变化34-37
• 3.4 cofilin蛋白的磷酸化水平在脑发育不同阶段的动态变化37-39
• 3.5 大脑皮层中PAK和Nischarin蛋白的相互作用39-40
• 3.6 大脑皮层中LIMK和Nischarin蛋白的相互作用40-41
• 3.7 Nischarin对其下游蛋白PAK、LIMK及cofilin活性的调控41-43
• 3.8 Nischarin对体外培养神经细胞PC-12迁移性能的影响43-45
• 4 讨论45-50
• 5 结论50-51
• 参考文献51-55
• 综述55-67
• 参考文献63-67
• 作者简历67

【共引文献】

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本文编号：349070