miR-148a在HMGB1诱导的小鼠系膜细胞增殖中的作用及其可能机制

发布时间：2017-05-06 21:13

  本文关键词：miR-148a在HMGB1诱导的小鼠系膜细胞增殖中的作用及其可能机制，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：探讨miR-148a是否可以通过靶向PTEN减少对PI3K/Akt信号通路的抑制，从而介导HMGB1引起的小鼠系膜细胞的增殖。 方法： 1以小鼠系膜细胞MMC为研究对象，随机分为1. normal group；2.HMGB1group;3. miR-148a mimic+HMGB1group;4. pre-miR+HMGB1group;5. miR-148a inhibitor+HMGB1group;6. anti-miR+HMGB1group，以western blot技术检测PTEN、p-Akt-S473、Akt、PCNA、Cyclin D1、CDK4和p16蛋白的表达水平；免疫细胞化学技术检测PCNA蛋白表达；BrdU掺入及免疫荧光技术检测BrdU的表达情况。 2将常规培养的小鼠系膜细胞MMC随机分为1. normal group；2.HMGB1group;3. miR-148a mimic+HMGB1group;4. PTEN-WT+HMGB1group;5. miR-148a mimic+PTEN-WT+HMGB1group;6. NC+pre-miR+HMGB1group，以western blot技术检测PCNA蛋白的表达。 结果： 1miR-148a mimic下调HMGB1诱导的小鼠系膜细胞中PTEN蛋白的表达，而miR-148a inhibitor上调HMGB1诱导的小鼠系膜细胞中PTEN蛋白的表达 Western blot结果显示：与HMGB1刺激组相比， miR-148amimic+HMGB1转染组PTEN蛋白水平明显降低（0.35±0.028），而miR-148a inhibitor+HMGB1转染组中PTEN蛋白水平明显升高（1.06±0.045）差异具有统计学意义（P0.05）。HMGB1刺激组和pre-miR+HMGB1刺激组相比，PTEN蛋白表达无显著性差异，但均低于正常对照组（P0.05）。（Fig.1、2， Table1） 2miR-148a mimic上调HMGB1诱导的小鼠系膜细胞中p-Akt-S473蛋白的表达，而miR-148a inhibitor则下调HMGB1诱导的小鼠系膜细胞中p-Akt-S473蛋白的表达 HMGB1刺激小鼠系膜细胞20min后，western blot结果显示：miR-148amimic+HMGB1转染组p-Akt-S473蛋白水平明显升高（1.085±0.067），与HMGB1刺激组相比，差异具有统计学意义（P0.05），HMGB1刺激组和pre-miR+HMGB1刺激组相比，p-Akt-S473表达无显著性差异，但均高于正常对照组（P0.05）。（Fig.3， Table2）转染miR-148ainhibitor+HMGB1刺激组中p-Akt-S473蛋白水平明显降低（0.467±0.013），差异具有统计学意义（P0.05），（Fig.4，Table2）而各组之间总Akt无明显差异。 3miR-148a mimic上调HMGB1诱导的小鼠系膜细胞的增殖水平 与正常对照组相比，HMGB1刺激组中BrdU和PCNA蛋白表达明显上调，miR-148a mimic+HMGB1转染组中PCNA蛋白表达显著高于HMGB1刺激组，BrdU的阳性表达率也显著升高，差异具有统计学意义。HMGB1刺激组和pre-miR+HMGB1刺激组相比，，PCNA和BrdU阳性表达率无明显差异。（Fig.5，Fig.6） Western blot结果显示：与HMGB1刺激组相比， miR-148amimic+HMGB1转染组PCNA蛋白表达明显升高（1.04±0.045），差异具有统计学意义（P0.05），而HMGB1刺激组和pre-miR+HMGB1刺激组相比，PCNA蛋白表达无显著性差异。（Fig.7，Table3） 4miR-148a inhibitor下调HMGB1诱导的小鼠系膜细胞中PCNA蛋白的表达 Western blot结果显示：与HMGB1刺激组相比， miR-148ainhibitor+HMGB1转染组PCNA的蛋白水平明显降低（0.50±0.035），差异具有统计学意义（P0.05）。而HMGB1刺激组和anti-miR+HMGB1刺激组相比，差异无统计学意义，但均高于正常对照组（P0.05）。（Fig.8，Table3） 5miR-148a mimic上调HMGB1诱导的小鼠系膜细胞中Cyclin D1和CDK4蛋白的表达水平，而miR-148a inhibitor则下调HMGB1诱导的小鼠系膜细胞中Cyclin D1、CDK4蛋白的表达 Western blot结果显示：miR-148a mimic+HMGB1转染组与HMGB1刺激组相比，Cyclin D1和CDK4蛋白水平明显升高（1.08±0.024,0.89±0.025），差异具有统计学意义（P0.05）（Fig.7，Table3）；而miR-148ainhibitor+HMGB1转染组与HMGB1刺激组相比，Cyclin D1和CDK4蛋白水平明显降低（0.19±0.016，0.48±0.013），差异具有统计学意义（P0.05）。（Fig.8，Table3） 6miR-148a mimic下调HMGB1诱导的小鼠系膜细胞中p16蛋白的表达，而miR-148a inhibitor上调小鼠系膜细胞中p16蛋白的表达 HMGB1刺激MMC8h后， Western blot结果显示： miR-148amimic+HMGB1转染组与HMGB1刺激组相比，p16蛋白水平明显降低（0.32±0.019），差异具有统计学意义（P0.05）（Fig.7，Table3）。而miR-148a inhibitor上调HMGB1诱导的p16蛋白表达（0.84±0.02），差异具有统计学意义（P0.05）。（Fig.8，Table3） 7同时转染miR-148a mimic和PTEN-WT质粒可以下调HMGB1诱导的PCNA蛋白表达 Western blot结果显示：与HMGB1刺激组相比，PTEN-WT质粒转染组，PCNA蛋白表达水平明显降低（0.22±0.02），差异具有统计学意义（P0.05）；而同时转染PTEN-WT质粒和miR-148a mimic后，给与HMGB1刺激，系膜细胞中PCNA蛋白的表达水平较PTEN-WT转染组显著升高（0.64±0.02），差异具有统计学意义（P0.05）。（Fig.9，Table4） 结论： miR-148a可能通过靶向PTEN，降低PTEN蛋白的表达，减弱对PI3K/AKT通路的抑制作用，促进Akt-S473位点磷酸化，通过上调CyclinD1/CDK4，下调p16，促进系膜细胞增殖。
【关键词】：狼疮性肾炎 HMGB1 miR-148a PTEN PI3K/Akt 细胞增殖
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R363
【目录】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 前言11-12
• 材料与方法12-21
• 结果21-24
• 附图24-33
• 附表33-35
• 讨论35-38
• 结论38-39
• 参考文献39-42
• 综述 microRNA 与系统性红斑狼疮42-50
• 参考文献46-50
• 致谢50-51
• 个人简历51-52

【共引文献】

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本文编号：349160