NF-κB在海马神经元癫痫模型中的表达

发布时间：2017-05-08 12:02

  本文关键词：NF-κB在海马神经元癫痫模型中的表达，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究目的： 1、颞叶癫痫是一种难治性癫痫,是神经科常见的临床综合征,其发病机制尚未完全阐明。目前NF-κB在神经系统疾病中的作用是神经病学研究的热点之一,研究发现NF-κB通过介导免疫损伤,可造成脑损害； 2、探讨体外海马神经元癫痫的发病机制； 3、探讨无镁细胞外液诱导海马神经元放电后NF-κB的表达及活性的研究,并进一步验证体内大鼠癫痫模型中NF-κB表达结果的可信度,从而为临床抗癫痫药物提供一定的理论基础。 实验方法： 以体外原代培养的Sprague Dawley乳鼠(出生24小时之内)大脑海马神经元作为实验材料,体外培养7天后,进行实验。 1、细胞形态学观察：于倒置相差显微镜下观察各组细胞形态,并采集各组细胞形态的图像。 2、免疫荧光染色法(MAP2)对体外培养的神经元进行纯度鉴定：用MAP2抗体标记神经元,DAPI染核,在荧光显微镜下观察,并采集图像。 3、利用膜片钳技术检测神经元痫样放电。 4、Western blot方法检测正常对照组和实验组NF-κB的表达水平。 5、免疫荧光染色法对实验组和对照组细胞内NF-κB的表达水平和亚细胞定位进行检测。 实验结果： 1、细胞形态学观察及神经元纯度鉴定： 正常神经元经体外培养48小时后大多数呈纺锤形,部分呈椭圆形或三角形,细胞突起可见,培养第7天时胞体立体感好,形态饱满,突起更丰富,相互交织成网络。采用神经元特异性抗体微管相关蛋白2(MAP2)进行免疫荧光染色(详见实验方法2),荧光倒置显微镜采集荧光信号,鉴定结果显示：培养第2天的神经元阳性率为50%～60%(图1),而培养第7天所得神经元阳性率达95%(图2)。无镁细胞外液处理的海马神经元生长状态良好,部分神经元胞体相互聚集,交织成神经网络。 2、膜片钳检测结果显示： 以正常组细胞作为对照组,在正常细胞外液中,电流钳记录到正常神经元偶然会有动作电位的发放,该动作电位的幅度范围为60～70mV。而经无镁细胞外液处理3h后再恢复到正常细胞外液的条件下,出现神经元持续强直高频爆发的“癫痫样”自发性放电,其电压幅度为60～80mV,频率大幅度提高。 3、Western blot印迹法显示： Western blot结果显示无镁处理海马神经元组(实验组)与正常对照组NF-κB蛋白表达相对灰度值比较差异有统计学意义(P0.05)。 4、免疫荧光方法检测细胞定位及表达水平 正常对照组海马神经元NF-κB主要在胞浆表达,无镁处理实验组海马神经元NF-κB在胞核表达为主,提示神经元被活化,与western blot结果相一致。 实验结论： 1、在原代培养的海马神经元中,无镁细胞外液可诱导海马神经元产生稳定的、持续的体外神经元癫痫持续状态模型。该模型具有实验条件恒定、易控制、实验周期短的优点,所以是生理、药理、病理等研究领域的重要方法之一。 2、在原代培养的海马神经元中, Western blot实验结果显示：实验组(无镁处理组)NF-κB蛋白表达比正常对照组增加,差异具有明显的统计学意义(p0.05)。 3、在原代培养的海马神经元中,免疫荧光结果显示：正常对照组NF-κB蛋白主要在海马神经元胞浆表达,而实验组(无镁处理组)NF-κB蛋白主要在神经元胞核表达,提示神经元被活化,NF-κB发生核移位。 4、结合上述结果,提示NF-κB可能是参与癫痫活动的重要机制之一。
【关键词】：体外培养 神经元 癫痫 NF-κB
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R742.1;R-332
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 符号说明9-10
• 前言10-13
• 研究现状、成果10-11
• 研究目的、方法11-13
• 对象和方法13-22
• 实验动物13
• 主要仪器设备13
• 主要试剂及耗材13-15
• 主要溶液及配方15-17
• 实验方法17-22
• 统计学处理22
• 结果22-27
• 乳鼠海马神经元纯度鉴定22-23
• 形态学观察23-24
• 膜片钳检测神经元痫样放电24
• Western blotting法检测蛋白表达水平24-26
• 免疫荧光染色法检测表达水平和亚细胞定位26-27
• 讨论27-32
• 结论32-33
• 参考文献33-36
• 发表论文和参加科研情况说明36-37
• 综述 NF-κB特点及与癫痫关系的研究进展37-52
• 综述参考文献46-52
• 致谢52

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 刘月影,袁宝强;严重惊厥发作过程中核因子-κB活化与神经元凋亡的关系[J];中国当代儿科杂志;2005年03期

2 孙玉明;吴飞翔;缪雪蓉;吕欣;徐学武;杨立群;吴镜湘;俞卫锋;;坐骨神经结扎大鼠脊髓组织Toll样受体4及下游细胞因子表达的变化[J];第二军医大学学报;2008年08期

3 张蕴增;;癫痫的外科治疗[J];家庭医学;2007年12期

4 张瑞华;王玉平;孟繁花;杜会山;;癫痫的治疗研究现状[J];脑与神经疾病杂志;2008年04期

5 郭伟;王奇;陈云波;;细胞核因子κB信号转导途径内的活化与调节机制研究进展[J];实用医学杂志;2006年11期

6 刘晓;邢丽娜;;核转录因子NF-κB与肿瘤[J];实用肿瘤学杂志;2007年02期

7 黄亚玲;孙丹;刘亚黎;;戊四氮反复点燃致不同发育期大鼠海马损伤的病理改变[J];中华儿科杂志;2005年12期

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本文编号：351082