富集舌癌干细胞动物模型的建立与干细胞标志Oct-4检测的实验研究

发布时间：2017-05-11 05:04

  本文关键词：富集舌癌干细胞动物模型的建立与干细胞标志Oct-4检测的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的： 1、建立富集舌癌干细胞的动物模型，解决舌癌干细胞研究中因癌干细胞数量少所致的瓶颈问题。 2、检测Tca8113细胞系癌干细胞标志的表达情况,为从细胞系中分离舌癌干细胞提供前期实验依据。 方法：选取舌癌Tca-8113细胞系为研究对象,以化疗药物干预为基本手段,采用裸鼠体内微环境建立富集舌癌干细胞模式,主要构建模式如下：建立舌癌裸鼠皮下移植瘤动物模型,采用裸鼠腋窝皮下注射癌细胞,并将荷瘤鼠随机分为对照组和实验组,对照组不予化疗药物干预,只按相同方式注射等量生理盐水,实验组给予低剂量化疗富集舌癌干细胞,采用环磷酰胺腹腔注射,剂量100mg/kg,8天为一个周期,连续注射3天,停药5天,肿瘤最大直径达1.5cm时取材原代培养,并在体连续反复传代5次,分别命名为Tca-8113/CTX P1+～Tca-8113/CTX P5+,评价各代的体内成瘤能力,同时用球囊形成率来证实经环磷酰胺富集的舌癌细胞中癌干细胞的比率,最后通过实时荧光RT-PCR方法检测干细胞标志Oct4的mRNA表达。 结果：在裸鼠两侧腋窝皮下注射Tca-8113亲代细胞后,成瘤率为100%,形成的异种移植瘤体内反复连续传代5次,同时给予低剂量化疗压力。1至5代Tca-8113细胞的成瘤时间分别是11、9、7、7、5天,体内成瘤能力逐步增强,利用100mg/Kg环磷酰胺富集的第五代舌癌细胞的体内成瘤能力最强；而1～5代肿瘤细胞在体内的生长速度也大致呈递增趋势。在球囊形成实验中,第1、2、3代细胞TCA-8113/CTX P1+、TCA-8113/CTX P2+、TCA-8113/CTX P3+细胞在第3天开始逐渐皱缩、死亡,只有第4、第5代细胞能形成“球囊”,球囊形成率分别为：(8.25±3.41)%,(11.23±4.47)%,n=3,并表达出较强的“干性”,通过对第4、第5代细胞Oct-4基因的mRNA进行检测,其表达显著增加,第5代(Tca-8113/CTX P5)的Oct4基因mRNA水平最高,显著高于对照组(P0.05)。 结论：裸鼠皮下移植瘤传代联合环磷酰胺干预模式,可有效富集舌癌细胞系Tca-8113细胞中癌干细胞特性细胞群,在体内成瘤能力的比较中逐代增强；Oct-4基因很有可能是舌癌干细胞特异性标志之一。
【关键词】：舌癌 癌干细胞 富集 干细胞标志
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R739.86;R-332
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 前言8-10
• 第一部分 裸鼠皮下移植瘤富集癌干细胞模型的建立及富集的5代舌癌细胞的获得10-21
• 1 材料与方法10-12
• 2 实验方法12-15
• 3 实验结果15-17
• 4 讨论17-21
• 第二部分 实时荧光RT-PCR检测干细胞标志的实验研究21-32
• 1 材料与方法21-23
• 2 实验方法23-27
• 3 实验结果27-30
• 4 讨论30-32
• 全文结论32-33
• 参考文献33-37
• 附录1 综述37-50
• 参考文献44-50
• 附录2 中英文缩略词表50-51
• 致谢51

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 黄品助;卢灿亮;李斌奎;洪健;黄亮;王莉;张颖;元云飞;;OCT4在肝细胞癌中的表达及其临床意义[J];癌症;2010年01期

2 姚宏亮;杨竹林;李永国;;胃良恶性病变组织中PSCA和Oct-4的表达及意义[J];中南大学学报(医学版);2008年07期

3 姚金光;解继胜;李俊;韦星;杨永荣;陈海波;;舌癌单细胞培养建系与癌干细胞相关标志的检测[J];华西口腔医学杂志;2013年01期

4 James A Thomson;;Nanog and transcriptional networks in embryonic stem cell pluripotency[J];Cell Research;2007年01期

5 Wen Li;Wei Yang;Xiu-Jie Wang;;Pseudogenes:Pseudo or Real Functional Elements?[J];遗传学报;2013年04期

  本文关键词：富集舌癌干细胞动物模型的建立与干细胞标志Oct-4检测的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：356279