小鼠骨髓间充质干细胞向胰岛素分泌细胞诱导分化过程中调控PDX1基因表达的miRNAs的鉴定

发布时间：2017-05-11 11:08

  本文关键词：小鼠骨髓间充质干细胞向胰岛素分泌细胞诱导分化过程中调控PDX1基因表达的miRNAs的鉴定，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 实现小鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stemcells，bMSCs）向胰岛素分泌细胞（insulin-producing cells，，IPCs）的诱导分化并对分化过程中可能调控胰十二指肠同源异型框基因1（Pancreatic and duodenal homeobox gene1，PDX1）表达的miRNAs进行鉴定。 方法 首先，分离培养bMSCs，应用conophylline和尼克酰胺将其诱导分化为IPCs，采用双硫腙（DTZ）染色和免疫荧光检测胰岛素的表达。然后，采用靶基因预测软件miRanda和TargetScan对调控PDX1基因表达的miRNAs进行预测并通过双荧光素酶报告基因系统鉴定。 qRT-PCR检测诱导分化过程中miRNAs及PDX1的表达。 结果 BMSCs传至3~4代，细胞均匀分布，形态规则均一，呈长梭形，折光性强。诱导分化后的细胞变成圆形、椭圆形，并且成团悬起；DTZ染色呈猩红色，提示细胞中有锌离子，参与胰岛素的合成；细胞免疫荧光显示分化2w后的细胞内有胰岛素表达，显示绿色荧光。生物信息学方法预测得到miR-149、 miR-346、 miR-133a和miR-133b共4个可能调控PDX1表达的miRNAs，通过双荧光素酶报告基因系统检测发现其中的miR-149和miR-346能结合到PDX1mRNA的3'UTR并有效抑制其表达。qRT-PCR检测结果表明，miR-149和miR-346的表达水平与PDX1表达呈负相关。 结论 miR-149和miR-346能负性调控IPCs诱导分化过程中PDX1的表达。
【关键词】：微小RNA 胰十二指肠同源异型框基因1 胰岛素分泌细胞 小鼠
【学位授予单位】：辽宁医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329
【目录】：

• 中文论著摘要4-6
• 英文论著摘要6-8
• 英文缩略语表8-9
• 前言9-10
• 实验材料与方法10-16
• 实验结果16-25
• 讨论25-28
• 结论28-29
• 本研究创新性的自我评价29-30
• 参考文献30-33
• 综述33-41
• 参考文献37-41
• 在学期间科研成绩41-42
• 致谢42-43
• 个人简介43-44

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 ;Expression of Pdx-1 in bone marrow mesenchymal stem cells promotes differentiation of islet-like cells in vitro[J];Science in China(Series C:Life Sciences);2006年05期

  本文关键词：小鼠骨髓间充质干细胞向胰岛素分泌细胞诱导分化过程中调控PDX1基因表达的miRNAs的鉴定，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：357105