FGF10通过K-RAS调控小鼠肺发育的分子机制

发布时间：2017-05-12 02:03

  本文关键词：FGF10通过K-RAS调控小鼠肺发育的分子机制，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：肺是上皮细胞和周围间充质相互作用形成的典范器官,它以支气管反复分支形成的支气管树为结构基础,最终形成肺泡。研究表明,肺发育过程中结构和功能的异常,可能是人体容易产生肺部疾病的重要原因。数量众多的生长因子在肺的形态发生过程中起着复杂而精细的调控作用,FGFs(成纤维细胞生长因子)就是其中之一。早在上个世纪30年代就发现了这种能促进成纤维细胞生长的活性物质,它的家族成员众多,其中FGF10(角朊细胞生长因子)是发育过程中多种器官的重要信号调节因子,比如四肢、肺、牙齿、胰腺、眼睑、脑垂体、皮肤等。研究表明,FGF10在发育中的肺间充质中表达,为肺发育所必须,其下游主要有四条信号通路,但具体作用机制还知之甚少。K-RAS是最早被发现的癌基因之一,也是FGFs下游信号的重要分子开关,研究表明,许多人类恶性肿瘤的发生都与RAS基因的突变有关。但FGF10是否是通过RAS-MAPK这一条信号通路对肺发育起调控作用仍不得而知。 本研究通过SP-C-rtTA、(Teto)7-Cre和pMes-FGF10三种转基因小鼠的相互交配构建出FGF10基因条件性在肺Ⅱ型上皮细胞中过表达的三转基因小鼠,利用原位杂交和Real-time PCR技术对野生型小鼠FGF10基因的时空表达模式进行了检测,通过免疫组织化学等方法对P28的三转基因小鼠的肺部组织进行了组织病理学分析。结果表明,FGF10在三转基因小鼠中成功实现了条件性过表达,导致肺Ⅱ型上皮细胞过度增殖,肺部出现大面积的肺腺瘤样组织增生,并且主要集中在远端区域,这和由于K-RAS激活型突变引发的肺部肿瘤症状非常相似。经检测,K-RAS蛋白的表达量显著升高,尤其是在肿瘤密集的区域,其下游转录因子CREB的表达也明显增强。说明FGF10是通过K-RAS基因调控肺发育过程的,FGF10的过表达使其下游RAS-MAPK信号通路过度打开,并最终导致了肺腺瘤样组织增生的出现。以上研究有利于对生长因子调控的信号通路分子机制的深入探讨,对肺部相关肿瘤疾病的治疗和抗肿瘤药物的研发也具有重要意义。
【关键词】：三转基因小鼠 FGF10 K-RAS 肿瘤 肺Ⅱ型上皮细胞
【学位授予单位】：福建师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363;Q25
【目录】：

• 中文摘要2-3
• Abstract3-5
• 中文文摘5-8
• 目录8-10
• 绪论10-22
• 第一章 实验材料与方法22-38
• 1.1 实验材料22-28
• 1.1.1 实验动物22-23
• 1.1.2 实验仪器与设备23
• 1.1.3 实验耗材23
• 1.1.4 主要实验药品及试剂23-28
• 1.2 实验方法28-38
• 1.2.1 原位杂交28-32
• 1.2.2 Real-time PCR32-34
• 1.2.3 小鼠肺组织切片的HE染色34-35
• 1.2.4 小鼠肺组织切片的免疫组织化学显色35-36
• 1.2.5 转基因小鼠基因型鉴定36-38
• 第二章 实验结果38-56
• 2.1 Real-time PCR对野生型小鼠胚胎发育各个时期FGF10基因的表达模式检测38-39
• 2.2 原位杂交定位检测野生型小鼠胚胎发育各个时期FGF10基因的表达39-41
• 2.3 SP-C-rtTA-(Teto)_7-Cre-FGF10三转基因小鼠模型的构建41-43
• 2.3.1 SP-C-rtTA-(Teto)_7-Cre-FGF10三转基因小鼠的构建策略41-43
• 2.4 SP-C-rtTA-(Teto)_7-Cre-FGF10三转基因小鼠基因型鉴定43-44
• 2.5 SP-C-rtTA-(Teto)_7-Cre-FGF10三转基因小鼠的整肺形态观察44-45
• 2.6 SP-C-rtTA-(Teto)_7-Cre-FGF10三转基因小鼠肺组织切片HE染色观察45-47
• 2.7 SP-C-rtTA-(Teto)_7-Cre-FGF10三转基因小鼠肺组织近端标记物检测47-48
• 2.8 SP-C-rtTA-(Teto)_7-Cre-FGF10三转基因小鼠肺组织远端标记物检测48-51
• 2.9 SP-C-rtTA-(Teto)_7-Cre-FGF10三转基因小鼠肺组织FGF10的表达检测51-52
• 2.10 SP-C-rtTA-(Teto)_7-Cre-FGF10三转基因小鼠肺组织增殖情况检测52-53
• 2.11 SP-C-rtTA-(Teto)_7-Cre-FGF10三转基因小鼠肺组织RAS-MAPK信号通路检测53-56
• 第三章 分析与讨论56-60
• 3.1 FGF10基因在野生型小鼠鼠肺发育各个时期的表达变化56
• 3.2 SP-C-rtTA-(Teto)_7-Cre-FGF10小鼠的构建与鉴定56-57
• 3.3 SP-C-rtTA-(Teto)_7-Cre-FGF10三转基因小鼠组织形态与近远端结构分析57-58
• 3.4 SP-C-rtTA-(Teto)_7-Cre-FGF10三转基因小鼠肺组织中的RAS-MAPK信号通路检测58-60
• 第四章 实验结论60-62
• 参考文献62-66
• 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果66-68
• 致谢68-70
• 个人简历70-71

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前9条

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本文编号：358519