小鼠可溶性IL-5受体α在BactoBac系统中的表达纯化及其对哮喘小鼠模型治疗效果的研究

发布时间：2017-05-12 13:19

  本文关键词：小鼠可溶性IL-5受体α在BactoBac系统中的表达纯化及其对哮喘小鼠模型治疗效果的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：支气管哮喘（Bronchial Asthma），简称哮喘，是一种以可逆性气流受限为特征的呼吸道慢性炎症性疾病。常常伴随呼吸道高反应性、黏液高分泌、支气管平滑肌收缩、可逆性气道阻塞等症状[1]。目前，全球有哮喘患者约3亿人，中国哮喘患者约3000万，并且中国的哮喘发病率正不断升高，哮喘已经成为严重影响我国人民身心健康的重要呼吸系统疾病之一[2]。 一般认为，哮喘是由于Th2细胞释放多种类型细胞因子在炎症部位聚集，从而导致局部的炎症反应。这些细胞因子中，白细胞介素5（Interleukin-5，IL-5）发挥了重要的作用[3]。IL-5可以促使嗜酸性粒细胞（Eosinophils，Eos）的成熟、分化、活化并与血管内皮细胞粘附[4]。目前认为，IL-5是通过一个高亲和力受体（IL-5R）复合物作用于Eos的。IL-5R复合物包括α和β两种亚基。α亚基可与IL-5结合激活其下游通路而发挥生物学功能。α亚基有膜结合型和可溶型两种不同的转录体，可溶性α亚基可与膜结合型α亚基竞争结合配体从而达到对IL-5下游信号转导的负调节作用，进而抑制嗜酸性粒细胞在过敏性呼吸道炎症部位聚集，影响哮喘的发病过程[5]。目前通过抑制IL-5功能来降低嗜酸性粒细胞聚集，从而抑制哮喘发病中的关键环节已成为当前哮喘疾病的研究热点。IL-5单克隆抗体能够在一定程度上抑制哮喘过敏性炎症反应，但由于其异种免疫原性而使其应用受到限制[6]。因此，研究一种全面改善哮喘症状且适用于多种类型哮喘患者的药物迫在眉睫。 目的：本研究选Bac-to-Bac杆状病毒蛋白表达系统表达并纯化小鼠可溶性IL-5Rα蛋白，通过研究重组sIL-5Rα在哮喘模型动物中治疗作用，初步探讨sIL-5Rα对哮喘的治疗效果，并为新的哮喘治疗药物的开发提供数据支持。 方法及结果：应用Vector NTIAdvanceII软件优化小鼠IL-5Rα基因胞外区密码子并合成序列。并定向克隆于pFastbacI/HTB载体上。pFastbacI/HTB-sIL5Rα转化感受态DH10Bac细胞，筛选阳性单克隆DH10Bac细菌，提取重组杆粒Bacmid-sIL5Rα，转染sf9昆虫细胞株，获取完整的重组杆状病毒。鉴定成功后扩增病毒并表达蛋白，并用Western Blot法鉴定重组蛋白为sIL5Rα蛋白。应用Ni2+亲和层析法纯化蛋白，纯化后测定重组蛋白浓度为0.22mg/mL。应用重组蛋白干预哮喘模型小鼠并检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞、肥大细胞、中性粒细胞、淋巴细胞细胞百分比，BALF中IL-5、IL-4、Extoxin含量以及和肺组织病理学变化。结果显示用重组sIL5Rα蛋白治疗后，治疗组嗜酸性粒细胞百分比显著降低，BALF中IL-5、Extoxin水平降低，肺组织病理学变化减轻。 结论：本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功表达并纯化了小鼠可溶性IL-5Rα蛋白，并用重组可溶性IL-5Rα蛋白治疗小鼠哮喘模型，经检测，，小鼠模型支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞百分比、IL-5、Extoxin较模型组有所降低，病理检测结果有所好转。这说明sIL-5Rα蛋白在哮喘模型动物中发挥了一定的治疗作用。
【关键词】：sIL-5Rα Bac to Bac表达系统 Western Blot 哮喘模型
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R562.25;R-332
【目录】：

• 缩略语表5-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-14
• 文献回顾14-27
• 一、哮喘概述14-16
• 二、哮喘与 IL-516-21
• 三、IL-5、IL-5 受体与哮喘21-24
• 四、杆状病毒昆虫表达载体系统24-27
• 第一部分 小鼠可溶性 IL-5Rα蛋白在 pFastbacI 载体中的表达与纯化27-55
• 1 材料27-30
• 2 方法30-44
• 3 结果44-52
• 4 讨论52-55
• 第二部分 小鼠可溶性 IL-5Rα蛋白在 pFastbacHTB 载体中的表达与纯化55-67
• 1 材料55-56
• 2 方法56-60
• 3 结果60-65
• 4 讨论65-67
• 第三部分 可溶性 IL-5Rα蛋白对小鼠哮喘模型的治疗效果研究67-76
• 1 材料67-68
• 2 方法68-71
• 3 结果71-74
• 4 讨论74-76
• 小结76-77
• 参考文献77-84
• 附录84-86
• 个人简历和研究成果86-87
• 致谢87

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 王曼芝;何庆南;袁红霞;刘晓亮;;IL-4IL-5及IgE在儿童咳嗽变异性哮喘中的价值[J];中国当代儿科杂志;2006年05期

2 施俊;吕静荣;吴皓;;未合并变应性鼻炎及哮喘的OSAHS儿童血清Th1/Th2细胞因子检测及临床意义[J];临床耳鼻咽喉头颈外科杂志;2012年23期

  本文关键词：小鼠可溶性IL-5受体α在BactoBac系统中的表达纯化及其对哮喘小鼠模型治疗效果的研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：359905