基于报告病毒和细胞活性的抗EV71和CA16病毒药物筛选方法的建立及应用

发布时间：2017-05-12 14:00

  本文关键词：基于报告病毒和细胞活性的抗EV71和CA16病毒药物筛选方法的建立及应用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：手足口病(HFMD)是一种常见的儿科疾病，主要由肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A16型（CA16）感染引起。近年来，手足口病频繁爆发，已成为西太平洋地区最受关注的公共健康问题之一。当前仍没有上市的针对EV71和CA16的疫苗和抗病毒药物，因此，急需研究出有效的抗病毒疗法。 本研究建立了一个以报告病毒和细胞活性检测为基础的两步筛选平台并应用于筛选EV71和CA16药物。首先，利用两种报告病毒，带有荧光素酶基因的假病毒和带有增强型绿色荧光蛋白基因的感染性病毒，对400种高度纯化的天然化合物库进行初筛。然后用传统的检测细胞活性的方法对初筛产生的候选化合物进行复筛，进一步确认它们的抗病毒活性。 经过两轮筛选，得到了三种具有抗病毒活性的小分子化合物（木犀草素、高良姜素和榭皮素），其中木犀草素对EV71和CA16的抑制效果最强，我们对其进行了深入的研究。通过细胞病变（CPE）减少实验和空斑减少实验，得到的木犀草素的半数抑制浓度(IC50)均为10μM左右。初步机制研究表明，木犀草素作用于病毒的吸附后阶段，并抑制病毒RNA的复制。综上所述，本研究建立了一种两步法的抗病毒药物筛选系统，并为EV71和CA16抗病毒药物研究提供了一种前体化合物。
【关键词】：肠病毒71型 柯萨奇病毒A16 木犀草素 报告病毒 高通量筛选 抗病毒药物研究
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R373
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-6
• 英文缩略词表6-7
• 目录7-9
• 引言9-18
• 1. 手足口病介绍9-12
• 2. 抗手足口病药物研究进展12-16
• 3. 本文的立题依据和实验设计16-18
• 第一章 筛选方法的建立及应用18-28
• 第一节 报告病毒的制备18-21
• 1. 材料与方法18-19
• 2. 实验结果19-21
• 3. 小结21
• 第二节 筛选条件的选取及筛选过程21-28
• 1. 材料与方法21-23
• 2. 实验结果23-27
• 3. 小结27-28
• 第二章 木犀草素抗病毒作用的评价28-33
• 1. 材料与方法28-29
• 2. 实验结果29-32
• 3. 小结32-33
• 第三章 木犀草素抗病毒机理的初步研究33-36
• 1. 材料与方法33
• 2. 实验结果33-35
• 3. 小结35-36
• 讨论36-38
• 结论38-39
• 参考文献39-45
• 致谢45-46
• 在读期间发表的论文46-47
• 作者简介47

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