黄芪多糖在白色念珠菌重组蛋白疫苗中免疫增强作用研究

发布时间：2017-05-12 14:13

  本文关键词：黄芪多糖在白色念珠菌重组蛋白疫苗中免疫增强作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：黄芪多糖是从中药黄芪中提取出来的多聚糖，是黄芪中含量最多，免疫活性较强的天然成分，研究证明，黄芪多糖具有免疫调节功能及药理功效，还具有来源广泛、细胞毒性低、增强免疫效果等特点，可以作为疫苗佐剂进行实验研究。 白色念珠菌是广泛寄居在宿主体内的一种条件致病真菌，目前对于白色念珠菌感染的治疗主要是通过一些抗真菌的药物，但系统性白色念珠菌感染，服用抗真菌药物后仍有70%的死亡率,因此选择良好的疫苗激发机体的适应性和固有性免疫将成为研制安全有效的白色念珠菌疫苗的重要策略。研究发现，白色念珠菌热休克蛋白90（Hsp90）是白色念珠菌的一种免疫优势抗原，是免疫应答的主要靶位，能够诱导机体产生保护性抗体，而其中的表位C是一种保守表位，能够与所有病人的血清起反应，因此可以将其作为白色念珠菌疫苗的候选抗原。本实验室表达了含有白色念珠菌热休克蛋白90表位C的重组蛋白（rP-HSP90C），可以作为疫苗，但是重组疫苗免疫原性较差，需要一种安全有效的佐剂来增强其免疫效果。 本论文以黄芪多糖（APS）作为疫苗佐剂与rP-HSP90C共同免疫ICR小鼠，皮下注射免疫两次，末次免疫后的第14天，对免疫小鼠进行眼球取血，收集血清进行后续实验，来研究黄芪多糖的免疫增强作用。Western Blot实验检测免疫小鼠抗血清中抗体的特异性；ELISA实验检测抗血清中特异性抗体IgG、IgG1及IgG2b的抗体滴度；ELISA试剂盒检测抗血清中IL-2、IL-12、IL-4、IL-10的含量；迟发型超敏反应实验；检测肾脏的真菌负荷量以及分析肾组织切片的病理变化研究APS对rP-HSP90C抗系统性白色念珠菌免疫保护作用的影响。 实验结果表明，APS与rP-HSP90C共同免疫小鼠后，其血清中特异性抗体IgG、IgG1及IgG2b滴度及IL-2、IL-12、IL-4、IL-10含量明显高于rP-HSP90C组；增强了迟发型超敏反应；免疫保护实验结果显示，APS与rP-HSP90C共同免疫组小鼠肾组织匀浆培养得到的白色念珠菌菌落数显著少于rP-HSP90C组，肾脏的受损程度明显减弱。 实验结果有利地证明了APS作为rP-HSP90C疫苗的佐剂显著增强了Th1型和Th2型免疫应答，增强了rP-HSP90C疫苗抗系统性白色念珠菌感染的能力，，为APS在疫苗佐剂领域中的应用奠定了实验基础，也为白色念珠菌感染的疫苗的研制奠定了实验基础。
【关键词】：黄芪多糖 白色念珠菌 重组蛋白疫苗 佐剂
【学位授予单位】：东北师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 中英文缩写9-10
• 第一章 文献综述10-18
• 1.黄芪多糖及其免疫药理作用概述10-12
• 1.1 黄芪多糖对免疫器官的作用10
• 1.2 黄芪多糖对免疫细胞的作用10
• 1.3 黄芪多糖对细胞免疫的影响10-11
• 1.4 黄芪多糖对体液免疫的影响11
• 1.5 黄芪多糖对粘膜免疫的影响11
• 1.6 黄芪多糖的抗病毒、抗菌作用11
• 1.7 黄芪多糖的抗肿瘤作用11
• 1.8 黄芪多糖的抗氧化作用11-12
• 2.佐剂及其种类简介12-14
• 2.1 铝佐剂12
• 2.2 脂质体佐剂12
• 2.3 细胞因子佐剂12
• 2.4 皂苷及免疫刺激复合物(ISCOM)佐剂12-13
• 2.5 细菌毒素佐剂13
• 2.6 核酸和CpG序列佐剂13
• 2.7 植物多糖佐剂13-14
• 3.白色念珠菌及其疫苗简介14-16
• 3.1 全菌疫苗14-15
• 3.2 糖结合疫苗15
• 3.3 多肽疫苗15
• 3.4 DNA 疫苗15
• 3.5 核糖体疫苗15-16
• 3.6 细胞壁表面成分疫苗16
• 3.7 杀伤细胞毒素疫苗16
• 3.8 蛋白疫苗16
• 4.研究目的及意义16-18
• 第二章 实验材料与方法18-28
• 1 实验材料及仪器18-19
• 1.1 实验材料18
• 1.2 主要实验试剂18-19
• 1.3 实验仪器19
• 2 实验方法19-28
• 2.1 rP-HSP90C 的制备19-22
• 2.2 APS 在 rP-HSP90C 中的免疫增强作用研究22-24
• 2.2.1 免疫动物22
• 2.2.2 Western blot 方法检测免疫小鼠抗血清中抗体的特异性22-23
• 2.2.3 ELISA 法检测免疫小鼠血清中特异性抗体滴度23-24
• 2.2.4 ELISA 试剂盒检测免疫小鼠抗血清中 IL-2、IL-12、IL-4、IL-10 的含量24
• 2.2.5 迟发型超敏反应实验24
• 2.3 APS 对免疫后小鼠抗系统性白色念珠菌感染的免疫保护作用的影响24-27
• 2.4 数据分析27-28
• 第三章 实验结果与分析28-38
• 1.rP-HSP90C 的 SDS-PAGE 电泳分析28
• 2.APS 的免疫增强作用结果分析28-38
• 2.1 Western blot 检测免疫小鼠抗血清中抗体的特异性28-29
• 2.2 APS 对免疫小鼠抗血清中抗 rP-Hsp90C 特异性抗体滴度的影响29-32
• 2.3 APS 对免疫小鼠抗血清中 IL-2、IL-12、IL-4、IL-10 的影响32-33
• 2.4 APS 对小鼠迟发型超敏反应的影响33-34
• 2.5 APS 对免疫小鼠抗系统性白色念珠菌感染的免疫保护作用34-38
• 第四章 讨论38-40
• 1.免疫剂量的确定38
• 2.APS 增强了 Th1 型和 Th2 免疫应答38-39
• 2.1 APS 增强了 Th1 免疫应答38-39
• 2.2 APS 增强了 Th2 型免疫应答39
• 3.APS 增强了 rP-HSP90C 抗系统性白色念珠菌感染的免疫保护作用39-40
• 结论40-41
• 参考文献41-44
• 致谢44

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 解慧梅;穆祥;胡格;刘易通;于同泉;路苹;黄会岭;;黄芪多糖对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO的影响[J];北京农学院学报;2005年04期

2 王传强;马保臣;秦卓明;袁小远;;疫苗佐剂的研究进展[J];家禽科学;2006年07期

3 张小梅;黄芪多糖的免疫调节作用及抗肿瘤作用研究进展[J];大连大学学报;2003年06期

4 欧德渊;高铭宇;刘世会;刘若余;;黄芪多糖对大肠埃希菌侵入肠上皮细胞的保护研究[J];动物医学进展;2006年08期

5 姚秀娟;王米;江善祥;薛飞群;;黄芪多糖药理作用及在动物生产中的应用研究进展[J];饲料工业;2009年18期

6 安静;田河;;黄芪多糖的免疫药理作用概述[J];中国畜牧兽医;2012年05期

7 项杰;王育斌;徐涛;樊毅;尤鸿;;黄芪多糖在宿主抵抗李斯特菌中的作用[J];武汉大学学报(医学版);2007年06期

8 孔令梅;;黄芪的免疫调节作用[J];内蒙古医学杂志;2007年01期

9 吴梅;谭睿;;黄芪多糖研究进展[J];川北医学院学报;2013年01期

10 杨琼;苏全平;温得中;王丽;;系统性白色念珠菌感染的免疫应答反应及疫苗研究进展[J];生理科学进展;2006年03期

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本文编号：359997