不同葡萄糖浓度培养基对原代乳鼠心肌细胞影响的研究

发布时间：2017-05-12 22:03

  本文关键词：不同葡萄糖浓度培养基对原代乳鼠心肌细胞影响的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：乳鼠心肌细胞人工体外培养技术由Harary在1960年创立,经过半个多世纪的发展,现已成为心血管研究领域一门十分重要的成熟的基础技术,广泛应用于心肌生理、心肌肥大、心肌缺血/再灌注损伤、心肌再生等研究。葡萄糖作为乳鼠心肌细胞培养基的主要成分之一,对心肌细胞的生长、增殖和功能状态维持等都具有重大影响。内质网是细胞内负责蛋白质合成、转运、修饰和正确折叠等生理功能的细胞器,对细胞和机体至关重要。然而,当内质网受某些因素影响导致未折叠或错误折叠蛋白蓄积时,将引起内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)。研究发现,ERS参与了许多疾病的发生,如肥胖、糖尿病、肿瘤和心肌肥大、心肌缺血/再灌注损伤等,还可能与糖尿病心肌病有关。葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein78,GRP78)是应激诱导的内质网预留蛋白,是维持内质网稳态的重要调节剂,也是内质网应激的经典标志物。本实验通过观测细胞形态学及活性的改变、GRP78在蛋白及基因水平表达量的变化,并以衣霉素处理组作为阳性对照,探讨不同葡萄糖浓度培养基对原代乳鼠心肌细胞的影响关系。 目的：通过观察原代乳鼠心肌细胞在不同葡萄糖浓度培养基作用下细胞形态学、活性以及内质网应激的情况,以探讨葡萄糖对原代乳鼠心肌细胞的影响关系。 方法：使用不同葡萄糖浓度的培养基(葡萄糖浓度分别为5.6mmol/L(低糖)、11.1mmol/L(中糖)、25mmol/L(高糖))原代培养乳鼠心肌细胞；以加入1mg/L或5mg/L衣霉素孵育心肌细胞6h、12h或24h作为阳性对照。然后对各实验分组在高倍倒置相差显微镜下观察心肌细胞形态及搏动状况,CCK-8法检测细胞活性,HE染色后观察细胞形态变化,并用Western blot法、RT-PCR法检测GRP78的表达水平。 结果：高糖培养基及中糖培养基组乳鼠心肌细胞明显较低糖培养基组生长更旺盛、增殖数量更多、伸出伪足更多、形态学评分更高、搏动频率更高、细胞活性更好(p0.01),高糖培养基组与中糖培养基组之间差异不明显；高糖培养基组心肌细胞GRP78表达量无论是在蛋白水平还是在基因水平都较中糖培养基组及低糖培养基组明显升高(p0.01),甚至达到了阳性对照组的水平,而中糖培养基组和低糖培养基组GRP78表达量之间无显著差异；阳性对照组中加入1mg/L或5mg/L衣霉素孵育6h、12h或24h组之间的GRP78蛋白表达量无明显差异。 结论：高糖培养基诱发了原代乳鼠心肌细胞显著的内质网应激。
【关键词】：葡萄糖 高糖 心肌细胞 GRP78 内质网应激
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 致谢4-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 目录10-11
• 1 引言11-13
• 2 材料和方法13-28
• 3 结果28-38
• 4 讨论38-42
• 参考文献42-48
• 综述48-63
• 参考文献59-63
• 作者简历及在学期间发表的文章63

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本文编号：360925