ALLN、UPFⅡ单用及联用对去血清饥饿诱导大鼠骨骼肌细胞凋亡降解的影响及机制

发布时间：2017-05-12 22:14

  本文关键词：ALLN、UPFⅡ单用及联用对去血清饥饿诱导大鼠骨骼肌细胞凋亡降解的影响及机制，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨钙蛋白酶抑制剂ALLN（N-acetyl-Leu-Leu-Norleucinal）与外源性泛素-蛋白酶体片段Ⅱ（Ubiquitin/Proteasome FractionⅡ, UPFⅡ）单用及联用对去血清饥饿大鼠骨骼肌细胞凋亡降解的影响及其可能机制。 方法:离体培养3-5日龄SD大鼠骨骼肌卫星细胞，倒置显微镜下适时观察、拍照、记录骨骼肌细胞的生长状态；采用HE染色以及骨骼肌肌动蛋白单克隆抗体(α-sarcometric actin)免疫荧光方法鉴定骨骼肌细胞，待细胞培养成熟稳定后调整浓度，随机分为5组：（1）A组(完全培养基对照组)，（2）去血清饥饿系列：B组(单纯基础培养基对照组)、C组(基础培养基+UPFⅡ组)、D组(基础培养基+UPFⅡ+ALLN组)、E组(基础培养基+ALLN组)；采用噻唑蓝（MTT）法测定各组细胞在药物干预72h后的生存率，采用适时荧光定量PCR法检测各组细胞在药物干预72h后Calpain-3、MuRF-1、Atrogin-1在mRNA水平的表达情况。 结果:1.MTT结果分析显示：与完全培养基A组比较，去血清饥饿B、C、D、E组细胞生存率分别为（57.89%±5.07%）、（41.22%±4.87%）、(56.94%±6.02%)、（69.72%±6.25%），各组生存率均下降（P0.05)；E组细胞生存率较B、C、D组均高（P0.05）；D组生存率较C组高（P0.05）；B组与D组之间无明显差异（P0.05）。 2.实时荧光定量PCR结果显示：与A组比较，去血清饥饿B、C、D、E组细胞Calpain-3、MuRF-1、Atrogin-1的mRNA表达量分别为23.71±0.10/23.18±0.08/22.22±0.10倍、24.52±0.07/24.10±0.07/23.29±0.05倍、23.78±0.07/23.11±0.05/22.15±0.07倍、22.60±0.04/22.37±0.10/21.65±0.08倍，差异性均显（P0.05）；E组细胞各基因表达量较B、C、D组均明显降低（P0.05）；D组细胞各基因表达量较C组均明显降低（P0.05）；B组与D组之间无明显差异（P0.05）。 结论:适量钙蛋白酶抑制剂ALLN能有效抑制外源性泛素-蛋白酶体UPFⅡ对骨骼肌细胞凋亡降解的促进作用；在骨骼肌细胞的凋亡降解过程中，泛素-蛋白酶体系统可能要受到钙蛋白酶体系统的先导性控制。
【关键词】：钙蛋白酶抑制剂 泛素-蛋白酶体 骨骼肌细胞 原代培养 细胞凋亡
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R363
【目录】：

• 目录3-4
• 中文摘要4-5
• Abstract5-7
• 主要英文缩略表7-8
• 引言8-11
• 材料和方法11-18
• 结果18-23
• 讨论23-30
• 结论30-31
• 参考文献31-36
• 致谢36-37
• 综述37-46
• 参考文献44-46

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

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本文编号：360996