草酸钙结晶肾损伤模型小鼠肾小管上皮细胞EMT发生与法舒地尔保护作用及机制的研究

发布时间：2017-05-13 03:00

  本文关键词：草酸钙结晶肾损伤模型小鼠肾小管上皮细胞EMT发生与法舒地尔保护作用及机制的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：梗阻性肾病中最为常见的病因为泌尿系结石，且随着生活水平的提高，结石的发病率也不断攀升，左、右肾结石的发病率相当，双肾结石的发病率约7%-10%，其中草酸钙结石占肾结石的比例约为80%。肾结石对人体产生的危害不仅局限于梗阻，结石形成后所致的肾功能不全对人群影响更为严重，而其介导的肾损害的发生机制仍不明确，与此同时，为寻找新的治疗措施，本文拟观察草酸钙结晶肾损伤模型中肾小管上皮细胞EMT的发生情况，并探讨相关的治疗药物及其可能的作用机制，为临床医学提供新的治疗途径。 第一部分：草酸钙结晶肾损伤模型小鼠肾小管上皮细胞EMT发生与ROCK1变化 [目的]研究乙醛酸盐诱导所致草酸钙结晶肾损伤模型小鼠EMT的发生情况并观察ROCK1的表达情况。 [方法]选择C57BL/6J小鼠连续腹腔注射乙醛酸盐建立草酸钙结晶肾损伤模型，实验结束后留取肾脏组织，应用HE染色及冯库萨染色分别观察肾脏结构变化及钙盐沉积情况，并应用免疫荧光双染标记监测EMT的发生情况，同时应用RT-PCR、Western blot检测ROCK1的表达情况。 [结果]随着连续腹腔注射乙醛酸盐时间的延长，模型小鼠肾脏HE染色结果显示，近端肾小管管腔逐渐可见具有折光性的不规则晶体的粘附，且肾小管上皮细胞逐渐出现肿胀及变形，基底膜逐渐裸露；冯库萨染色显示近端小管腔内黑色钙盐沉积逐渐增加；免疫荧光双染、RT-PCR、Western blot结果均显示肾小管上皮标志E-cadherin及Pan-ck逐渐丢失，而间质标志α-SMA及Vimentin的表达则逐渐增加，此外，RT-PCR及Western blot检测结果均显示随着乙醛酸盐干预的增强，ROCKI表达也逐渐增加，且在干预第三天即达高峰并维持。 [结论]乙醛酸盐诱导所致草酸钙结晶肾损伤模型早期即存在EMT，启动了纤维化的进程，并有Rho/ROCK信号转导通路的参与。 第二部分：Rho激酶特异性抑制剂法舒地尔对草酸钙结晶肾损伤的干预作用 [目的]观察Rho激酶特异性抑制剂法舒地尔对乙醛酸盐诱导的结晶性肾损伤的干预效应。 [方法]选取C57BL/6J小鼠，随机分为正常对照组、单纯乙醛酸盐组、乙醛酸盐加法舒地尔组，实验结束后留取肾脏组织，应用HE染色、冯库萨染色、苦味酸-天狼星红、免疫组化、RT-PCR、Western-blot检测Rock特异性抑制剂法舒地尔的干预效应。 [结果]三组小鼠实验结果比较显示，乙醛酸盐加法舒地尔组与正常对照组相比，其肾组织结够稍有破坏，钙盐有所沉积并出现了少许的纤维化，上皮标志E-cadherin及Pan-ck的表达有所下降，间质标志α-SMA及Vimentin亦有少量的表达，此外PAI-1、OPN、CD44及ROCK1的表达亦有所增加；而与单纯乙醛酸盐组相比，其肾组织结构破坏明显减轻，钙盐沉积有所减少，α-SMA、Vimentin、PAI-1、OPN、CD44及ROCK1的表达明显减少，同时E-cadherin、Pan-ck表达有所增加，肾纤维化程度明显缓解。 [结论]Rho激酶特异性抑制剂法舒地尔对乙醛酸盐诱导的结晶性肾损伤具有保护效应。 第三部分：法舒地尔对草酸钙结晶肾损伤的保护机制 [目的]探讨法舒地尔对乙醛酸盐诱导的结晶性肾损伤保护作用的机制。 [方法]选取C57BL/6J小鼠，，随机分为正常对照组、单纯乙醛酸盐组、乙醛酸盐加法舒地尔组，实验结束后留取肾脏组织，应用Western-blot检测各组小鼠smad2、smad3、p-smad2、p-smad3及PAI-1的表达情况，同时应用免疫组化的方法检测细胞的增殖及凋亡情况。 [结果] Western blot检测结果显示，三组中smad2及smad3的表达无明显差异，而PAI-1、p-smad2及p-smad3于乙醛酸盐加法舒地尔组中其表达虽较正常对照组有所增加，但与单纯乙醛酸盐组相比其表达则明显减弱。PCNA及Tunel检测显示，乙醛酸盐加法舒地尔组与正常对照组相比其细胞凋亡有所增加、细胞增殖较活跃，而与单纯乙醛酸盐组相比，其细胞凋亡及细胞增殖均有明显下降。 [结论]法舒地尔对乙醛酸盐诱导的结晶性肾损伤的保护作用可能通过影响细胞的增殖与凋亡及Rho/ROCK——smad2/smad3——PAI-1信号转导通路。
【关键词】：结晶性肾损伤 ROCKI 上皮-间充质转分化 法舒地尔
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R-332;R692
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 缩略词表10-11
• 前言11-16
• 参考文献13-16
• 第一部分 草酸钙结晶肾损伤模型小鼠肾小管上皮细胞 EMT 发生与 ROCK116-37
• 实验材料16-19
• 实验方法19-28
• 实验结果28-34
• 讨论34-35
• 参考文献35-37
• 第二部分 Rho 激酶特异性抑制剂法舒地尔对草酸钙结晶肾损伤的干预作用37-52
• 实验材料37-38
• 实验方法38-42
• 实验结果42-49
• 讨论49-50
• 参考文献50-52
• 第三部分 法舒地尔对草酸钙结晶肾损伤的保护机制52-63
• 实验材料52-53
• 实验方法53-57
• 实验结果57-59
• 讨论59-60
• 参考文献60-63
• 全文总结63-64
• 综述64-70
• 参考文献67-70
• 在读期间发表论文情况70-71
• 致谢71

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

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本文编号：361384