高原鼠兔血红素氧合酶-1的基因克隆及序列分析

发布时间：2017-05-14 05:01

  本文关键词：高原鼠兔血红素氧合酶-1的基因克隆及序列分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景与目的 高原鼠兔是青藏高原特有的小型哺乳动物，为兔形目、鼠兔科、鼠兔属，世代生活在海拔3200~4700M的低氧、极寒高山草甸和草原，在其数代的自然选择、进化过程中已形成自己独特的高效率的能量代谢和氧传递利用机制，使其可以耐受高原环境的低氧、高寒，高原属兔对高原环境发展变化发挥着巨大的影响力，使其成为高原独特的生态系统的重要组成部分。 近年来大量研究指出，众多因素均可诱导HO-1的表达上调，HO-1及降解血红素产物一氧化碳、胆红素、胆绿素、和铁离子参与机体许多生理和病理过程，发挥着积极重要的调节作用。HO-1在氧化应激状态下，通过抑制炎性因子的产生、多方面抗氧化应激、直接衰减炎症应答，从而达到对细胞的保护。 本课题以高原鼠兔为研究对象，克隆并分析高原鼠兔HO-1基因cDNA序列，为从基因调控水平进一步探讨高原鼠兔低氧适应的分子生物学机制奠定了实验基础。 研究方法 2011年7月于青海省天俊县木里镇（海拔约4062M）捕捉高原鼠兔13只，平均体重200g。鼠兔采样后进行相关生理学指标采集后，25%乌拉坦腹腔注射麻醉，解剖后取肝组织并置于液氮中，低温保存备用并运回西宁。通过GenBank中公布的兔、人、牛、小鼠、大鼠等哺乳动物物种的HO-1的cDNA序列，根据其同源性，利用Primer5.0软件DNAMAN6.0软件结合鼠兔与以上各物种间HO-1比对得到的相对保守区来设计扩增引物。提取总RNA，利用逆转录酶链反应（RT-PCR）技术扩增目的基因，鉴定后测序。 研究结果 对测序结果进行拼接，所测序列得到cDNA全长序列，长度1466bp（GenBank登录号为：JX035934）。软件预测得出高原鼠兔HO-1基因编码区的核苷酸长度为873bp，可编码290个氨基酸。高原鼠兔HO-1与兔、人、牛、小家鼠、大鼠、猪、马H0-1核苷酸序列及氨基酸序列的同源性达到为80%以上。在本研究进行的氨基酸差异性位点分析中，所比较物种的15个氨基酸差异性位点中有5个位点（第4，92，223，250，255）可能导致各物种在调节HO-1与低氧相关因子子相互作用方面产生差异。 结论 本实验首次成功地获得高原鼠兔血红素氧合酶-1基因编码区cDNA序列全长（GenBank登录号为JX035934），15个氨基酸差异性位点中有5个位点（第4，92，223，，250，255）可能导致各物种在调节HO-1与低氧相关因子子相互作用方面产生差异，进而对高原低氧适应的调控造成重要的影响。多个基因位点的发生突变，从这一层面分析也反映出，与移居高原的同科物种比较，世居高原的鼠兔仍与其存在着结构、功能上的显著差异，这或许是高原鼠兔对高原遗传性适应的一种表现，也可能是其抗缺氧能力更强的原因之一，但是突变位点与高原适应相关联的具体机制仍有待于进一步研究。由于HO-1与细胞保护密切相关，上述发现为更进一步的了解高原鼠兔保护细胞免受氧化应激损伤的机理，通过进一步对高原鼠兔适应高原低氧高寒相关基因的研究，对于今后更好地及早干预氧化损伤疾病的发展进程，治愈氧化损伤等引起的疾病具有重大的意义。
【关键词】：高原鼠兔 血红素氧合酶-1 低氧适应 cDNA克隆 序列分析
【学位授予单位】：青海大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R3416
【目录】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-7
• 引言7-12
• 一. 材料与方法12-21
• 1.1 实验材料12-13
• 1.2 实验方法13-21
• 二．结果21-28
• 2.1 总 RNA 的提取21
• 2.2 PCR 扩增结果21-22
• 2.3 测序结果及序列分析22-28
• 三. 讨论28-32
• 四. 结论32-33
• 参考文献33-37
• 中英文缩略词表37-38
• 致谢38-39
• 文献综述39-48
• 参考文献45-48
• 攻读学位期间取得的研究成果48-50

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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  本文关键词：高原鼠兔血红素氧合酶-1的基因克隆及序列分析，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：364284