vWF-A3区单抗SZ-123抑制人vWF与Ⅰ型、Ⅲ型和Ⅳ型胶原的结合及其抗血小板黏附功能的研究

发布时间：2017-05-14 15:12

  本文关键词：vWF-A3区单抗SZ-123抑制人vWF与Ⅰ型、Ⅲ型和Ⅳ型胶原的结合及其抗血小板黏附功能的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景： 近年来，随着我国人口老龄化程度日益加重，血栓性疾病成为最常见的死亡病因之一，且其发病率仍在不断上升。而血栓性疾病中，动脉血栓引起的疾病因起病急，致残率及病死率高而受到广泛关注。动脉血栓的治疗主要是使用抗血小板药物治疗。临床广泛使用的第一代抗血小板药物包括阿司匹林、噻氯吡啶和氯吡格雷等，阿司匹林能阻断花生四烯酸途径，噻氯吡啶和氯吡格雷能选择性的抑制二磷酸腺苷（ADP）与其血小板受体结合，但这两类药物用于介入治疗时均容易发生“再梗”现象。第二代抗血小板药物包括Reopro和SZ-21，均为GPⅡb/Ⅲa拮抗剂，能阻断血小板血栓形成的最终环节,从而阻断血小板聚集的最后通路。虽然它们作用效果较强,但一些患者使用时会出现明显的出血副作用。赵益明等之前报道了一株特异性针对vWF-A3区的单克隆抗体（monoclonal antibody，mAb）-SZ-123，为血管性血友病因子(vonWillebrand factor，vWF) A3区鼠源性单克隆抗体，主要针对病理性血栓形成的第一步—血小板黏附，通过抑制血小板黏附来阻断病理性血栓的形成，但并不妨碍血小板聚集，从而减少出血的不良反应。 目的： (1)本研究旨在通过单抗SZ-123对vWF分别在Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原上的结合抑制实验来研究单抗SZ-123对vWF在血管内皮下各型胶原的抑制作用，进一步阐明单抗SZ-123的抗血栓功能。 (2)通过用体外血管腔模型（Flow Chamber）来模拟体内血管剪切力、温度等环境来研究单抗SZ-123的抗血小板黏附作用，也为将来开发基于单抗SZ-123的抗栓药物奠定基础。 方法： （1）首先用人胎盘Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原包板，加入正常人混合血浆与单抗SZ-123同时孵育后，再加入辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）标记的兔抗人vWF多克隆抗体孵育，四甲基联苯胺（Tetramethylbenzidine，TMB）显色后，用酶标仪读取吸光度值（OD）。 （2）乙酸酸化的人胎盘Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原分别包被在载玻片上，4℃过夜，经生理盐水洗涤后，，用2%BSA-PBS封闭，备用。经肝素抗凝（40U/ml）的人全血2管，一管加单抗SZ-123，另一管加单抗非抑制性抗体SZ-34为阴性对照，37℃孵育10min，在37℃，1000S-1剪切力的小室中灌注，将经血小板黏附的载玻片表面用生理盐水灌注2次后，在倒置显微镜下观察黏附的血小板，并使用SlideBook软件分析血小板黏附率。 结果： （1）vWF胶原结合抑制实验：结果表明SZ-123呈剂量依赖性地抑制人血浆中vWF与Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原的结合反应，对Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原的抑制率分别为95%、96%及41%。 （2）平板流动小室内血小板黏附实验（Flow Chamber）：结果表明，在高剪切力条件下、37℃环境中，SZ-123能够抑制人血小板在Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原上的黏附作用。 结论： （1）单抗SZ-123能够抑制人血小板在Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原上的黏附作用。 （2）单抗SZ-123对人血浆vWF与人Ⅰ、Ⅲ型胶原的结合抑制率明显高于与Ⅳ型胶原的结合。 （3）单抗SZ-123在高剪切力条件下具有较好的抗血小板黏附作用。为进一步开发基于单抗SZ-123的抗栓药物以及为更加深入的研究血栓形成的机制提供理论依据。
【关键词】：血管性血友病因子 胶原 血栓 vWF-A3区 单抗SZ-123 血小板黏附
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R392
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-16
• 参考文献13-16
• 第一部分 VWF-A3 区单抗 SZ-123 抑制人血浆 VWF 与Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原的结合作用16-21
• 材料和方法16-17
• 结果17-19
• 讨论19-20
• 参考文献20-21
• 第二部分 VWF-A3 区单抗 SZ-123 在体外血管腔模型中抗血小板黏附功能的研究21-26
• 材料和方法21-22
• 结果22-24
• 讨论24
• 参考文献24-26
• 结论26-27
• 综述27-35
• 参考文献32-35
• 中英文对照缩略词表35-36
• 攻读学位期间发表的论文及科研情况36-37
• 致谢37-39

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 姚拾秀;江淼;赵益明;;血管性血友病因子裂解蛋白酶活性检测方法的研究新进展[J];国际检验医学杂志;2013年15期

  本文关键词：vWF-A3区单抗SZ-123抑制人vWF与Ⅰ型、Ⅲ型和Ⅳ型胶原的结合及其抗血小板黏附功能的研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：365509