树鼩BACE1全长编码序列的克隆及分子特征分析

发布时间：2022-07-03 18:56

　　目的获取树鼩β-淀粉样前体蛋白切割酶BACE1 （beta-site APP cleaving enzyme-1）的全长编码序列并进行分子特征分析,为开展AD疾病的机制研究提供依据。方法提取树鼩大脑及其他脏器组织总RNA,通过RACE （rapid-amplification of cDNA ends）实验得到的序列与中间序列进行拼接得到树鼩BACE1全长编码序列,使用DNAMAN、MEGA 10.0.5、PyMOL等生物信息学软件,对其序列和分子特征进行分析。结果树鼩BACE1除在脑组织表达外,在外周组织也有表达。树鼩BACE1核酸序列和蛋白质分子整体结构与人类高度相似,树鼩与人类的BACE1蛋白在膜内结构区均存在一个高度保守的DXXLL的ACDL分选内吞基序,两者具有相同的胞外域、跨膜域及胞内域,但树鼩BACE1蛋白质相比人少一个潜在的乙酰基化位点,并且在折叠结构上存在差异。结论本研究获得树鼩BACE1基因完整编码序列,其蛋白基本结构与人的基本相似,提示树鼩可能是作为研究AD病理改变或药物研究潜在的理想模型。 

【文章页数】：10 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 实验动物
    1.2 实验方法
        1.2.1 树鼩BACE1的分子克隆
            (一) BACE1引物设计
            (二) RNA与cDNA制备
            (三) 普通PCR
            (四) 3’RACE巢式PCR
            (五) 5’RACE巢式PCR
            (六) 测序
        1.2.2 序列分析
        1.2.3 BACE1的表达模式分析
            (一) RNA相对表达定量
            (二) Western blotting
2 结果
    2.1 RACE 结果与序列分析
    2.2 树鼩BACE1氨基酸序列的分析
    2.3 BACE1蛋白三维结构分析
    2.4 树鼩BACE1基因在不同年龄段脑组织的表达分析
    2.5 树鼩BACE1蛋白的表达模式分析
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]老年痴呆症的早期干预探讨[J]. 曹树春,吕恒刚.  解放军预防医学杂志. 2019(02)
[2]树鼩在人类疾病动物模型中应用研究进展[J]. 黄晓燕,徐娟,孙晓梅,代解杰.  实验动物科学. 2013(02)
[3]颞叶和额叶癫痫认知功能特点的研究[J]. 杨二娟,毓青,白学军,陈英,杨卫东,陈旨娟,郭华爱.  天津医科大学学报. 2013(01)
[4]大脑枕叶语言功能的研究进展[J]. 方环海,王梅.  中国康复理论与实践. 2008(08)
[5]巨噬细胞内吞脂质的分子机制[J]. 陈琪.  中国动脉硬化杂志. 2007(07)
[6]β-分泌酶抑制剂的研究进展[J]. 廖国超,聂爱华,肖军海,钟武,李松.  中国药物化学杂志. 2006(06)
[7]阿尔茨海默病病因学研究进展及治疗展望[J]. 陈彪,马秋兰.  中华神经科杂志. 2003(02)

博士论文
[1]DKK1抑制巨噬细胞内脂质沉积及其相关分子机制[D]. 张瑜.山东大学 2015



本文编号：3655466