外源性硫化氢干预人脐静脉平滑肌细胞钙化机制研究

发布时间：2017-05-14 16:20

  本文关键词：外源性硫化氢干预人脐静脉平滑肌细胞钙化机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的本实验在运用组织块重复贴壁培养原代平滑肌细胞的基础上，复制人脐静脉平滑肌细胞（human umbilical vein smooth muscle cells, HUSMCs）钙化模型，探寻外源性硫化氢（hydrogen sulfide, H_2S）供体硫氢化钠（sodium hydrosulfide, NaHS）对HUSMCs钙化干预机制研究。方法 1.原代人脐静脉组织块重复贴壁培养法 以改良人脐静脉平滑肌细胞贴壁培养法为基础，将已培养组织块再次接种于新培养瓶中继续培养，用倒置显微镜观察细胞的生长，采用免疫细胞化学方法鉴定为平滑肌细胞。 2.H_2S对HUSMCs钙化干预及其机制研究 2.1在成功复制HUSMCs钙化模型基础上，给予NaHS进行培养，，实验分为6组（n=6）：对照组（10%FBS正常培养液）、钙化组（12mmol/L β-GP）、单纯NaHS组（8.0×10~(-6)M NaHS）、钙化+NaHS高剂量组（4.0×10~(-5)M NaHS）、钙化+NaHS中剂量组（8.0×10~(-6)M NaHS）、钙化+NaHS低剂量组（1.6×10~(-6)M NaHS）。 2.2检测方法 ①对细胞Von Kossa染色、显微图像分析、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性和细胞钙含量等指标进行检测，观察各组细胞钙沉积情况。 ②酶联免疫吸附法检测细胞培养液中转化生长因子β1(transforming growthfactorβ1, TGFβ1)的活性。 ③Real-Time PCR法检测细胞中TGFβ1mRNA及核心结合因子α1（core bindingfactor α1, Cbfα1）mRNA表达。 ④Western blot法检测HUSMCs中骨桥蛋白（osteopontin, OPN）表达。结果 H_2S对HUSMCs钙化的影响及其机制研究 ①H_2S可明显减少HUSMCs钙结节的聚集生长，Von Kossa染色显示细胞聚集处棕褐色钙结节较钙化组明显减轻（P＜0.05）；NaHS-低、中、高剂量组钙化细胞百分比、细胞钙含量和碱性磷酸酶活性较钙化组明显降低（P＜0.05）。 ②NaHS-低、中、高剂量组与钙化组相比，培养液中TGFβ1的活性、细胞内TGFβ1mRNA、Cbfα1mRNA表达及OPN表达均较钙化组减少（P＜0.05)。结论 H_2S可能通过影响TGFβ1-Smads-Cbfα1信号通路级联效应，减弱信号通路中关键信号分子TGFβ1、Cbfα1表达，减少OPN的表达，发挥抑制HUSMCs钙化的作用。
【关键词】：硫化氢 血管钙化 转化生长因子β1 核心结合因子α1 骨桥蛋白
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 前言10-13
• 材料方法13-37
• 结果37-41
• 讨论41-46
• 结论46-47
• 附图47-51
• 参考文献51-56
• 综述56-72
• 综述参考文献65-72
• 致谢72-73
• 攻读学位期间发表的学术论文73-74
• 个人简历74

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本文编号：365664