抗TRAIL单克隆抗体的性质研究及抗原表位鉴定

发布时间：2017-05-15 03:05

  本文关键词：抗TRAIL单克隆抗体的性质研究及抗原表位鉴定，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-induced ligand, TRAIL)是TNF超家族成员。与以往细胞因子配体相比,TRAIL不仅对多种肿瘤细胞有很强的诱导凋亡作用,而且具有能选择性介导肿瘤细胞凋亡而对大多数正常组织和细胞无损伤的功能。正因为如此,TRAIl已成为肿瘤治疗研究的热点。在TRAIL的研究过程中,高效的单克隆抗体是必不可少的。本论文主要研究了实验室前期构建、纯化得到的抗TRAIL单克隆抗体Abl和Ab2。本论文首先对这两株抗体的基本理化特性进行了鉴定：经SDS-PAGE鉴定可知,两株抗体的相对分子质量为150kd(其中轻链为25kd,重链为55kd)；使用间接ELISA检测表明,Ab1和Ab2腹水的效价为1×10-6；使用Ig亚类ELISA试剂盒测定Abl和Ab2的亚类可知,其Ig亚类为IgGl9(γ)；使用ITC技术对Abl和Ab2的亲和常数检测可知,它们的亲和常数分别为2.61×10-i-M和2.39×10-10M。通过ELISA实验,我们确定所制备的两株都能够特异性地与TRAIL相结合,并且具有较强的中和TRAIL诱导细胞凋亡的能力。上述数据都表明：我们制备的抗TRAIL单克隆抗体具有较高的亲和力、且具有中和TRAIL的性能。本论文还通过噬菌体展示技术确定了与我们所制备TRAIL抗体结合的TRAIL蛋白的抗原决定簇位点。这些为以后TRAIL的检测和临床治疗应用奠定了良好的基础。
【关键词】：TRAIL 单克隆抗体 噬菌体展示 分子模拟
【学位授予单位】：南京大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R392-33
【目录】：

• 摘要6-7
• Abstract7-8
• 第一部分 抗TRAIL单克隆抗体的性质研究8-22
• 前言8
• 1. 仪器及材料8-11
• 1.1 仪器8
• 1.2 试剂8-9
• 1.3 常用试剂配制9-11
• 2. 实验方法11-15
• 2.1. SDS-PAGE11-12
• 2.2. ELISA测定单克隆抗体的滴度12-13
• 2.3. ELISA对Ab1和Ab2特异性的检测13
• 2.4. 细胞流式法13-14
• 2.5. MTT14
• 2.6. Western Blot14-15
• 2.7. ITC15
• 3. 实验结果15-22
• 3.1. Ab1和Ab2理化性质鉴定15-17
• 3.2. Ab1和Ab2具有较好的TRAIL特异性17-18
• 3.3. Ab1和Ab2对TRAIL所诱导的细胞凋亡作用具有较强的中和效应18-22
• 第二部分 TRAIL单克隆抗体抗原表位鉴定22-35
• 前言22
• 1. 仪器及材料22-25
• 1.1. 仪器22
• 1.2. 试剂22-23
• 1.3. 常用试剂的配制23-25
• 2. 实验方法25-30
• 2.1. 噬菌体滴度的测定方法25-26
• 2.2. 噬菌体的扩增26-27
• 2.3. 噬菌体淘选27-30
• 2.4. 分子模拟30
• 4. 实验结果30-35
• 4.1. 利用噬菌体展示鉴定出Ab1和Ab2的抗原表位30-34
• 4.2. Ab1和Ab2可能通过阻碍TRAIL与DR5结合而发挥作用34-35
• 第三部分 总结35-36
• 第四部分 综述36-51
• 第五部分 参考文献51-62
• 第六部分 致谢62-63

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本文编号：366740