非免疫性人抗体Fab片段噬菌体文库的构建

发布时间：2022-08-13 16:57

　　本文论述了构建非免疫性人抗体Fab片段噬菌体文库的方法。 我们从健康人外周血淋巴细胞中提取总RNA逆转录成单链cDNA后用重链Fd片段和轻链的特异性5′和3′端引物分别PCR扩增抗体重链Fd基因和轻链基因。用SacⅠ和XbaⅠ酶切轻链PCR产物和噬粒载体pComb3，凝胶回收酶切产物，通过T4 DNA连接酶将轻链基因片段克隆到pComb3载体上，电穿孔转染大肠杆菌感受态细胞XL1-Blue，构建轻链库。摇菌扩增后提取质粒DNA，用XhoⅠ和SpeⅠ酶切，同时用相同的酶酶切重链Fd段PCR产物，用T4 DNA连接酶连接重链Fd基因和质粒DNA，电穿孔转染大肠杆菌感受态细胞XL1-Blue，摇菌扩增后提取质粒DNA，-70℃冻存留待以后再转化大肠杆菌，制备抗体库进行抗原筛选。 本实验通过构建噬菌体抗体文库，希望为今后本研究室的后续研究提供技术及物质支持。 

【文章页数】：71 页

【学位级别】：博士

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缩略语表
前言
材料与方法
结果
讨论
参考文献
结论
致谢
文献综述
附录



本文编号：3677405