结核分枝杆菌基因Rv2660c、Rv2460c、Rv3875、Rv3804c细胞表位融合蛋白的表达及其免疫原性评价

发布时间：2022-11-09 21:49

　　目的评价结核分枝杆菌基因Rv2660c、Rv2460c、Rv3875和Rv3804c的细胞表位融合蛋白的免疫原性,为研制新型多阶段结核疫苗提供可靠的靶抗原。方法将Rv2660c、Rv2460c、Rv3875和Rv3804c基因中的细胞表位串联构成融合抗原基因（命名为msv）,克隆到原核表达载体pEASY-Blunt E1中,诱导表达后采用亲和层析纯化表达产物,经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,用纯化的融合抗原蛋白免疫小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的特异性抗体滴度;分离免疫小鼠的脾淋巴细胞,采用淋巴细胞增殖法检测其免疫原性。结果成功构建了能表达融合抗原基因msv的原核表达质粒;SDS-PAGE和Western blot结果表明,表达产物亲和层析纯化后,获得相对分子质量为41.3×10~3的目的蛋白;ELISA检测免疫小鼠血清抗体滴度,结果表明特异性抗体效价约为1∶81 920;淋巴细胞增殖实验结果表明,抗原致敏的淋巴细胞经融合蛋白msv刺激后明显增殖。结论成功表达并纯化出融合蛋白msv,该融合蛋白可诱导小鼠特异性抗体表达和刺激细胞免疫应答,可作为结核疫苗的抗原组分。 

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株和质粒
        1.1.2 主要试剂
        1.1.3 实验动物
    1.2 方法
        1.2.1 结核分枝杆菌融合基因msv的合成
        1.2.2 融合抗原基因msv的扩增
        1.2.3 融合抗原基因msv原核表达载体的构建
        1.2.4 重组蛋白的诱导表达、鉴定及纯化
        1.2.5 动物免疫
        1.2.6 免疫小鼠抗体水平检测
        1.2.7 淋巴细胞增殖实验
        1.2.8 统计学方法
2 结果
    2.1 重组质粒的构建
    2.2 融合蛋白的表达与纯化
    2.3 免疫小鼠血清特异性抗体滴度
    2.4 免疫小鼠抗原特异性淋巴细胞增殖
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]用小鼠模型分析可溶性表达结核分枝杆菌Ag85A的免疫原性[J]. 徐正中,胡婷,刘泽,沈轩云,刘佳莹,殷月兰,孙林,陈祥,焦新安.  微生物学报. 2016(05)
[2]牛源多杀性巴氏杆菌融合基因pm0979-PlpE的表达及其融合蛋白的免疫效果[J]. 马建伟,李春明,冯思源,杜慧慧,彭远义.  中国兽医科学. 2015(10)
[3]结核分枝杆菌Rv2460c基因的克隆,表达及编码产物的免疫特性分析[J]. 康月茜,张春燕,穆柳青,卢楠,杨春,李岱容.  中国免疫学杂志. 2015(06)
[4]结核疫苗优势抗原ESAT6、CFP10的分子生物学基础及应用研究进展[J]. 范琴,鲍朗.  生物医学工程学杂志. 2012(02)
[5]大肠杆菌表达系统的影响因素[J]. 许崇利,杨梅,许崇波.  中国动物检疫. 2010(08)



本文编号：3704955