阴道毛滴虫病毒载体介导的锤头状核酶对Rab11C基因表达的影响

发布时间：2017-05-18 19:04

  本文关键词：阴道毛滴虫病毒载体介导的锤头状核酶对Rab11C基因表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：阴道毛滴虫（Trichomonas vaginalis, Donne1837）是寄生在人体阴道和泌尿道的鞭毛虫，主要引起滴虫性阴道炎和尿道炎。阴道毛滴虫病是全球性最广泛流行的非病毒性性转播疾病之一，每年大约有1.7亿人感染此病。尽管阴道毛滴虫感染率较高，但是关于阴道毛滴虫的致病机制、免疫原性、毒理等方面的报道较少。阴道毛滴虫病毒（Trichomonas vaginalis virus，TVV）属原虫病毒，专性寄生于阴道毛滴虫体内。阴道毛滴虫病毒与阴道毛滴虫的致病性、毒力、抗药性等有一定关系。 阴道毛滴虫病毒载体的成功构建使外源基因的导入得以实现，为蛋白质功能研究提供了新方法。本课题组已利用iTRAQ技术，比较分析阴道毛滴虫携病毒株滋养体与无病毒株滋养体的差异蛋白，找到了差异蛋白Rab11C蛋白。Rab11是Ras小分子GTP酶超家族的成员，目前研究证实Ras GTP酶作为重要调节因子，调节对阴道毛滴虫的致病过程中的形态变化起着至关重要的作用的G蛋白。 嵌合型锤头状核酶的构建及其对Rab11C基因体外转录体切割本试验用肝浸汤培养基对阴道毛滴虫携病毒及无病毒株进行体外纯培养。将包含Rab11C的锤头状核酶插入到阴道毛滴虫病毒载体中，构建了阴道毛滴虫病毒载体介导的嵌合型锤头状核酶pNME/RL和pNME/RS。体外试验表明pNME/RL和pNME/RS体外转录体对Rab11C体外转录体起到有效切割，切割效率分别为82.12%和80.20%，而作为对照的pNME/RA对Rab11C基因体外转录体的切割效率仅为32.69%，为进行体内试验提供了理论基础。 核酶对Rab11C基因表达抑制及对阴道毛滴虫病毒和虫体本身的影响将锤头状核酶pNME/RL和pNME/RS经电穿孔的方法转染到阴道毛滴虫体内，荧光定量PCR检测在体内pNME/RL和pNME/RS对Rab11C基因切割效率分别可达到82%和73%。通过显微镜观察及虫体计数的方法检测其对虫体的影响，对虫体计数显示，阴道毛滴虫滋养体在转染后，转染虫体的数量少于对照组虫体数，显微镜观察显示转染后虫体变形，活力减退，，表明Rab11C基因对虫体的生长、形态有一定影响。通过荧光定量PCR检测其对阴道毛滴虫病毒基因表达的影响，在转染后21d内，阴道毛滴虫病毒表达量有所下调。 本试验成功构建了阴道毛滴虫病毒载体介导的嵌合型锤头状核酶pNME/RL和pNME/RS，探讨Rab11C基因对阴道毛滴虫病毒以及虫体本身的影响，为阴道毛滴虫病毒载体在阴道毛滴虫分子生物学等领域的研究奠定了基础，为诊断及防治阴道毛滴虫病提供了新的方向。
【关键词】：阴道毛滴虫 阴道毛滴虫病毒 锤头状核酶 Rab11C基因
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R382.21;R3416
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-14
• 引言14-15
• 第一篇 文献综述15-40
• 第1章 阴道毛滴虫的研究进展15-32
• 1.1 阴道毛滴虫的进化背景、生活史及形态特点15-16
• 1.2 阴道毛滴虫病的流行病学及症状16-18
• 1.3 阴道毛滴虫的致病机制18-19
• 1.4 阴道毛滴虫的功能性基因19-23
• 1.5 阴道毛滴虫的诊断23-28
• 1.6 阴道毛滴虫病的防治28-32
• 第2章 阴道毛滴虫病毒的研究进展32-40
• 2.1 阴道毛滴虫病毒32-37
• 2.2 基因转染37-38
• 2.3 阴道毛滴虫病毒载体38-40
• 第二篇 研究内容40-86
• 第1章 阴道毛滴虫病毒载体介导的嵌合型锤头状核酶的构建40-58
• 1.1 材料与方法40-48
• 1.2 结果48-54
• 1.3 讨论54-56
• 1.4 小结56-58
• 第2章 阴道毛滴虫病毒载体介导的嵌合型锤头状核酶对 Rab11C基因体外切割58-66
• 2.1 材料与方法58-61
• 2.2 结果61-63
• 2.3 讨论63-64
• 2.4 小结64-66
• 第3章 阴道毛滴虫病毒载体介导的嵌合型锤头状核酶对 Rab11C基因表达抑制66-76
• 3.1 材料与方法66-69
• 3.2 结果69-72
• 3.3 讨论72-74
• 3.4 小结74-76
• 第4章 抑制 Rab11C基因表达对阴道毛滴虫病毒及虫体本身的影响76-86
• 4.1 材料与方法76-80
• 4.2 结果80-83
• 4.3 讨论83-84
• 4.4 小结84-86
• 结论86-87
• 参考文献87-107
• 攻读硕士期间的科研成果107-109
• 导师及作者简介109-113
• 致谢113

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 余祖华;丁轲;程相朝;张春杰;李银聚;吴庭才;;外源基因转染真核细胞技术的研究进展[J];安徽农业科学;2008年21期

2 肖真,曹守箴,张忠广,刘涛,余姣;斑点酶联免疫吸附试验检测阴道毛滴虫抗体的研究[J];青岛医学院学报;1992年01期

3 张永生，杜军，施雨露，易世红，伊藤洋一，牧纯;五种中药灭阴道毛滴虫体外试验初步研究[J];白求恩医科大学学报;1996年04期

4 易世红，梁国光，张永生;影响体外培养阴道毛滴虫因素的探讨[J];白求恩医科大学学报;1996年05期

5 唐玉钗,冯修高,兰小鹏,徐兵,朱忠勇;一种敏感的羧化胶乳阴道毛滴虫凝集试验(附486份试验报告)[J];福建医药杂志;1998年03期

6 史明珠,许兵红,艾予川,张斌,彭冬君,刘世国;不同pH值对阴道毛滴虫体外培养的影响[J];河南预防医学杂志;2002年04期

7 聂崇兴,赵双星;“妇乐安”杀灭阴道毛滴虫的试验[J];暨南大学学报(自然科学与医学版);1999年04期

8 方菁，吴少廷，冯友仁，周梓林;阴道栓剂治疗阴道毛滴虫感染小鼠的实验研究[J];寄生虫与医学昆虫学报;1995年01期

9 范宝昌,杨佩英;RNA病毒的反向遗传学操作[J];军事医学科学院院刊;2001年03期

10 唐正义,胡蓉;反义RNA研究进展[J];内江师范学院学报;2004年04期

  本文关键词：阴道毛滴虫病毒载体介导的锤头状核酶对Rab11C基因表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：376876