中国恒河猴在SIVmac239小剂量多次直肠黏膜暴露中的保护机制研究

发布时间：2017-05-18 20:04

  本文关键词：中国恒河猴在SIVmac239小剂量多次直肠黏膜暴露中的保护机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：艾滋病不典型疾病进程中的免疫保护机制一直都是人们关注的焦点。细胞免疫、中和抗体等在建立机体感染的患者中发挥的抗病毒作用都十分有限。本研究将重点放在B细胞及其介导的早期体液免疫反应及固有免疫的重要组份B1细胞上,研究其分泌的特异性和非特异性IgM抗体在SIVmac239直肠感染猴不同疾病进程中的变化规律,以期发现其中的免疫保护机制,为艾滋病感染机体机制、疫苗的研发提供有益的借鉴。 本研究使用8只正常中国恒河猴,应用SIVmac239中国恒河猴细胞适应株通过直肠途径感染实验猴。为了更好地模拟HIV在人群中自然传播方式,使用小剂量多次的感染方式,平均一周感染两次。分别在SIVmac239感染后不同时间点收集血清、EDTA抗凝血、十二指肠粘膜组织以及直肠冲洗液等样品,进行T、B淋巴细胞亚群及抗体水平的检测。病毒载量等实验结果显示,在SIVmac239病毒感染后出现了三种感染情况——典型疾病进展型、延迟进展型以及隐匿型。典型疾病进展组和部分延迟进展感染猴中,在感染早期就出现了明显的B细胞数量下降,提示这种变化与疾病进程之间的关系是值得关注的。 所有8只实验猴外周血中记忆性B细胞在SIVmac239感染过程中均呈现逐渐下降的趋势,但在肠粘膜固有层中则相反。这种变化在不同个体之间变化幅度无明显差异,与疾病进程之间无相关性。同样发现,与疾病进程无相关性的是IgM+记忆性B淋巴细胞,暴露后它在外周血和肠粘膜中比例都有所增加,且这种变化与IgM抗体产生的时间点一致,表明在SIV感染的早期,IgM+记忆性B淋巴细胞接受抗原刺激活化,且这种激活与后续的感染进程无关,是单纯的免疫激活过程。 在感染早期肠粘膜和外周血中B1细胞,主要为Bla细胞比例显著升高,肠粘膜中B1细胞增加的幅度远远高于外周血。黏膜中Bla细胞的比例在三组不同的感染模式中表现出显著性差异,提示B1a细胞比例的变化与疾病进程之间存在密切的关系。同期在粘膜局部检测到非特异性IgM抗体水平与疾病进程呈负相关,进一步证明在粘膜局部能早期诱导较强的B1,主要是B1a细胞增殖,分泌非特异性IgM抗体,推测可以在早期抑制病毒的入侵。 SIV感染能诱导机体产生抗SIV特异性IgM和IgG抗体。通常IgG抗体产生的时间晚于病毒载量高峰出现的时间,表明抗SIV特异性IgG抗体不能在感染早期及时有效地控制病毒的复制。本研究发现,特异性IgM抗体能在早期产生。虽然外周血中水平相对较低,但抗体水平和疾病进程之间也显示负相关性,表明特异性IgM抗体可能在早期抗感染过程中起到一定作用。 综上所述,在SIV感染早期,B细胞活化分泌抗SIV特异性IgM抗体参与机体的抗感染免疫。固有免疫中的B1细胞,主要是B1a细胞接受抗原刺激后分泌非特异性IgM抗体,在早期粘膜局部抗SIV感染过程中发挥重要作用,能在很大程度上影响疾病的进程。 最后,本研究还用抗人B淋巴细胞单克隆抗体(利妥昔单抗注射液,Rituximab)通过静脉滴注的方法敲除中国恒河猴体内B淋巴细胞,定期采集外周血、腹股沟淋巴结和十二指肠黏膜组织,制备淋巴细胞悬液,应用流式细胞术的方法系统性测定B淋巴细胞及T淋巴细胞亚群的变化及转归情况。结果表明,利妥昔单抗注射液能有效去除中国恒河猴体内B淋巴细胞。这一结果为深入探讨B淋巴细胞在SIV/HIV感染中的作用及其与病毒的复制和疾病进程的关系,提供了基础实验数据。
【关键词】：恒河猴 SIVmac239 直肠途径 小剂量多次 体液免疫 IgM抗体 B1淋巴细胞 B1a淋巴细胞 抗人B淋巴细胞单克隆抗体 B细胞敲除
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R512.91;R-332
【目录】：

• 主要英文缩写词4-5
• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-12
• 第一部分 中国恒河猴在SIVmac239小剂量多次直肠黏膜暴露中保护机制研究12-54
• 引言12-13
• 一、实验材料13-17
• 二、实验方法17-29
• 三、实验结果29-50
• 四、讨论50-53
• 五、结论53-54
• 第二部分 抗人B淋巴细胞单克隆抗体清除中国恒河猴体内B淋巴细胞效果观察54-66
• 引言54-55
• 一、实验材料55-58
• 二、实验方法58-59
• 三、实验结果59-63
• 四、讨论63-65
• 五、结论65-66
• 参考文献66-69
• 致谢69-70

【参考文献】

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1 熊竞;刘克剑;吴芳新;丛U

本文编号：377000