动物内源性多肽CGA-N46生物学特性研究

发布时间：2017-05-18 23:11

  本文关键词：动物内源性多肽CGA-N46生物学特性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：近年来，致病真菌感染日趋严重，并且超级耐药菌株也不断地出现，应加大开发新型抗菌药物的力度。CGA-N46是一种新型抗真菌多肽。研究其稳定性，对不同真核细胞的作用，对克柔念珠菌DNA和菌体蛋白作用，为将其开发成新型抗真菌制剂奠定理论基础。 CGA-N46的稳定性研究表明，100℃，加热15min；反复冻融6次其抑菌活性基本保持不变；在室温下放置72h会影响CGA-N46的抑菌活性，但无显著性改变（P＞0.05）；pH范围在4.0-7.0时，CGA-N46抑菌活性完全保持不变。 采用常规试管法和分光光度法研究CGA-N46对红细胞的溶血作用，结果显示CGA-N46即使在8倍MIC浓度下，都不会引起体外溶血；MTT法检测了CGA-N46对肺癌细胞A549和正常鸡胚成纤维细胞（CEF）体外增殖的影响，结果表明，CGA-N46对肺癌细胞A549的增殖具有较强的抑制作用，作用72h时抑制率达到了60.53%，对鸡胚成纤维细胞（CEF）的体外增殖无抑制作用。CGA-N46与抗生素氟康唑、特比萘芬联合使用对克柔念珠菌的抑制作用表现为相加作用，不仅能够提高其抑菌活性还能减少抗生素的使用剂量。 紫外分光光度计检测CGA-N46不会导致克柔念珠菌体内紫外吸收物质的泄露。DNA－CGA-N46凝胶阻滞实验证明CGA-N46不能使克柔念珠菌DNA在体外发生降解。流式细胞仪检测CGA-N46会引起克柔念珠菌的S期细胞比例升高，G2/M期细胞比例降低， CGA-N46对PCR反应的影响表明在DNA合成的过程中，CGA-N46能够影响TaqDNA聚合酶的功能使目的DNA的合成受到抑制作用。SDS-PAGE电泳检测表明CGA-N46能够抑制克柔念珠菌体内蛋白的正常表达。 因此，CGA-N46具有热稳定性，体外结构稳定，室温存放时间长，酸碱稳定性好，溶血性低，，对癌细胞有抑制作用，对正常成纤维细胞生长无影响，与抗生素联合用药表现相加作用，CGA-N46能够阻滞细胞分裂，将细胞阻滞在S期，PCR实验结果也证实CGA-N46阻滞DNA合成。同时CGA-N46对蛋白质合成也有影响。
【关键词】：抗真菌肽 体外稳定性 溶血性 抑癌活性 联合用药 DNA凝胶阻滞实验 流式细胞技术
【学位授予单位】：河南工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R3411
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-10
• 第一章 前言10-20
• 1.1 生物活性肽10-11
• 1.2 抗菌肽简介11-18
• 1.2.1 抗菌肽的结构11-12
• 1.2.2 抗菌肽的生物学活性12
• 1.2.3 抗菌肽对不同细胞的作用12-13
• 1.2.4 抗菌肽的作用机制13-15
• 1.2.5 抗菌肽的来源15-17
• 1.2.6 与传统抗生素相比的优势17-18
• 1.2.7 存在问题18
• 1.3 CGA-N46 的研究进展18-19
• 1.3.1 嗜铬粒蛋白18
• 1.3.2 CGA-N4618-19
• 1.4 本论文的研究目的和内容19-20
• 1.4.1 研究目的19
• 1.4.2 研究内容19-20
• 第二章 实验材料和方法20-36
• 2.1 实验材料20-24
• 2.1.1 实验菌种和实验动物20
• 2.1.2 主要试剂20-21
• 2.1.3 主要仪器21-22
• 2.1.4 培养基22
• 2.1.5 主要溶液22-24
• 2.2 实验方法24-36
• 2.2.1 CGA-N46 的制备24-25
• 2.2.2 CGA-N46 的稳定性分析25-26
• 2.2.2.1 加热温度和加热时间的影响25-26
• 2.2.2.2 冻融次数的影响26
• 2.2.2.3 室温放置时间的影响26
• 2.2.2.4 pH 值的影响26
• 2.2.3 CGA-N46 对不同真核细胞的作用26-31
• 2.2.3.1 CGA-N46 对红细胞的溶血作用26-28
• 2.2.3.2 CGA-N46 对肺癌细胞 A549 的作用28-29
• 2.2.3.3 CGA-N46 对鸡胚成纤维细胞的作用29
• 2.2.3.4 CGA-N46 与氟康唑、特比萘芬体外联合用药对克柔念珠菌的抑制作用29-31
• 2.2.4 CGA-N46 对克柔念珠菌 DNA 的影响31-34
• 2.2.4.1 克柔念珠菌紫外吸收物的渗透检测31
• 2.2.4.2 DNA-CGA-N46 凝胶阻滞实验31-32
• 2.2.4.3 流式细胞仪检测 CGA-N46 对克柔念珠菌细胞周期的影响32-33
• 2.2.4.4 CGA-N46 对 Taq DNA 聚合酶活性的影响33-34
• 2.2.5 CGA-N46 对克柔念珠菌蛋白合成的影响34-36
• 第三章 结果与分析36-51
• 3.1 CGA-N46 的分离纯化结果36-37
• 3.2 CGA-N46 的稳定性37-39
• 3.2.1 加热温度和加热时间的影响37
• 3.2.2 冻融次数的影响37-38
• 3.2.3 室外放置时间的影响38
• 3.2.4 pH 的影响38-39
• 3.3 CGA-N46 对真核细胞的作用结果39-42
• 3.3.1 CGA-N46 的溶血作用39-40
• 3.3.2 CGA-N46 对肺癌细胞 A549 的作用40-41
• 3.3.3 CGA-N46 对鸡胚成纤维细胞的作用41
• 3.3.4 CGA-N46 与氟康唑、特比萘芬体外联合用药对克柔念珠菌的抑制作用41-42
• 3.4 CGA-N46 对克柔念珠菌 DNA 的影响结果42-48
• 3.4.1 克柔念珠菌紫外吸收物的渗透检测42-43
• 3.4.2 DNA-CGA-N46 凝胶阻滞实验43-44
• 3.4.3 流式细胞仪检测 CGA-N46 对克柔念珠菌细胞周期的影响44-47
• 3.4.4 CGA-N46 对 DNA 聚合酶的作用47-48
• 3.5 CGA-N46 对克柔念珠菌体蛋白的影响结果48-51
• 3.5.1 SDS-PAGE 电泳检测 CGA-N46 作用后菌体蛋白变化48-51
• 第四章 讨论51-54
• 4.1 CGA-N46 对真核细胞的作用51-52
• 4.2 CGA-N46 对克柔念珠菌 DNA 的作用52-54
• 第五章 结论54-55
• 参考文献55-62
• 致谢62-63
• 个人简历63

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：377330