金葡菌SraP操纵子中GtfA和GtfB的序列分析及其调控SraP糖基化的研究

发布时间：2017-05-18 23:12

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【摘要】：【目的】分析临床金葡菌中SraP操纵子中GtfA和GtfB的序列差异，探究金葡菌中的GtfA和GtfB能否糖基化Srap及相关作用机制。 【方法】搜集55株临床金葡菌分离株，分别用三个独立的实时TaqManPCR实验扩增SraP, MecA和PVL基因。从金葡菌基因组扩增GtfA、GtfB以及GtfA-GtfB,并克隆到pETDuet-1，构建原核表达质粒pETDuet-A，pETDuet-B和pETDuet-AB。随后再从金葡菌基因组扩增SraP1-743，并分别克隆到pETDuet-A，pETDuet-B和pETDuet-AB的另一个多克隆位点，构建原核表达质粒pETDuet-AS，pETDuet-BS和pETDuet-ABS。最后采用免疫印迹实验与凝集素印迹实验分别检测SraP1-743的表达及其糖基化表型。 【结果】根据CLSI推荐标准，，55例临床金葡菌分离株中35(63.6%)例是MRSA(耐甲氧西林）金葡菌。RAPD-PCR分析发现55例临床金葡菌分离株中有14个不同的RAPD图谱(I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII和XIV)。结构同源性分析发现GtfA、GtfB分别和几个糖基化转移酶有重要的结构相似性。免疫印迹实验发现，当GtfA、GtfB和SraP1-743在大肠杆菌共表达时，用抗S-tag抗体在95-kD和120-kD附近均能检测到S-SraP1-743融合蛋白。只有GtfA（或）GtfB和SraP1-743在大肠杆菌共表达时，则只能在95-kD附近检测到S-SraP1-743融合蛋白。凝集素印迹实验发现，当GtfA、GtfB和SraP1-743在大肠杆菌共表达时，sWGA只能与120-kD附近的S-SraP1-743融合蛋白起反应。 【结论】本研究发现SraP存在于所检测的临床分离金葡菌中，RAPD-PCR显示金葡菌具有广泛的基因型多样性，GtfA和GtfB在临床分离金葡菌中高度保守。GtfA和GtfB能够启动GlcNAc糖基化SraP,但是单一的GtfA或GtfB不能启动GlcNAc糖基化SraP。
【关键词】：金黄色葡萄球菌 SraP GtfA GtfB 糖基化转移酶
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R378.11
【目录】：

• 英文缩略词5-6
• 前言6-10
• 参考文献8-10
• 摘要10-11
• Abstract11-12
• 绪言12-13
• 实验材料13-18
• 实验方法18-34
• 实验结果34-43
• 讨论43-45
• 参考文献45-47
• 结论47-48
• 综述48-70
• 参考文献65-70
• 致谢70-71
• 附录71-92

【共引文献】

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本文编号：377335