豚鼠离焦性近视眼模型及RPE细胞跨上皮电阻的研究

发布时间：2017-05-19 06:52

  本文关键词：豚鼠离焦性近视眼模型及RPE细胞跨上皮电阻的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的： 研究建立凹透球镜片诱导的离焦性豚鼠(guinea pig)近视眼模型,观察体外培养的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium RPE)细胞的跨上皮电阻(transepithelial electrical resistance TER),探讨建立RPE细胞单层屏障模型TER值稳定表达的时间区间。 方法： 将30只相同批次2周龄三色豚鼠随机分配成两组,即正常组(10只)和单眼离焦模型组(20只)(简称离焦组),离焦组采用-10.00D凹透球镜片缝于左眼(离焦眼)前2周：二组均于2周龄和4周龄双眼扩瞳后视网膜检影验光测量屈光度及A超测量仪测定眼轴长度；然后将离焦组豚鼠处死,取左眼RPE细胞进行原代培养,以细胞角蛋白(Cytokeratin)及S-100蛋白为标志物,采用免疫细胞化学染色法鉴定为阳性,传至第2代,接种于Millcell-PET插入式培养池内的微孔滤膜表面,待细胞融合为单层,在含1%血清浓度的培养液培养条件下,采用电阻测量仪连续检测并记录上皮细胞单层的TER值。 结果： 1.离焦眼的屈光度及眼轴长度的变化 离焦眼的近视屈光度增加,离焦组(-3.29士0.72D)与正常组(+3.18±0.50D)及自身对照眼(+1.42±0.60D)比较,差异有统计学意义(p0.05)；离焦眼的眼轴长度延长,离焦组(8.14±0.09mm)与正常组(7.54±0.07mm)及自身对照眼(7.89±0.07mm)比较,差异有统计学意义(p0.05)； 2.离焦眼RPE细胞的体外培养及鉴定 体外培养的离焦眼RPE细胞生长良好,顺利贴壁,‘均表达细胞角蛋白及S-100蛋白,阳性率均达100%,其细胞纯度高,能较好地保持视网膜色素上皮细胞固有的特征；RPE细胞传代能力良好,呈铺路石样整齐排列。 3.离焦眼RPE细胞的TER值检测 离焦眼RPE细胞的TER值随培养时间的延长逐渐增大,约在第12天基本稳定,且达57.18Q/cm2以上,并可保持其稳定性达8天。 结论： 1.凹透球镜片诱导可以成功建立豚鼠离焦性近视眼模型； 2.体外培养的豚鼠离焦性近视眼RPE细胞生长和传代能力良好； 3.体外培养的豚鼠离焦眼性近视眼RPE细胞能形成具有稳定TER值的上皮细胞单层结构,其稳定的TER值至少能维持8天,为下一步的干预研究实验奠定了模型基础。
【关键词】：凹透镜 豚鼠 RPE 跨上皮电阻
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R778.11;R-332
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-10
• 中英文对照10-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 材料与方法13-19
• 2.1 实验材料13-14
• 2.2 实验方法14-18
• 2.3 统计学方法18-19
• 第三章 实验结果19-23
• 3.1 屈光度与眼轴长度19
• 3.2 离焦性近视眼RPE细胞培养鉴定及传代19-21
• 3.3 离焦眼RPE细胞的TER值检测21-23
• 第四章 讨论23-27
• 一 离焦性近视眼动物模型的建立23-24
• 二 离焦性近视眼RPE细胞体外培养及鉴定24-25
• 三 体外培养RPE细胞TER检测意义25-27
• 第五章 结论27-28
• 参考文献28-31
• 综述 视网膜色素上皮细胞在近视中的研究进展31-46
• 参考文献42-46
• 致谢46

【参考文献】

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本文编号：377949