hHCN4基因修饰的骨髓间充质干细胞与心肌细胞共培养分化为心肌样细胞的实验研究

发布时间：2017-05-19 10:08

  本文关键词：hHCN4基因修饰的骨髓间充质干细胞与心肌细胞共培养分化为心肌样细胞的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 将hHCN4基因修饰的大鼠BMSCs细胞与乳鼠心肌细胞（Cardiac Myocyte,CM）进行共培养，对其细胞连接功能及起搏功能进行研究，检测hHCN4基因修饰的大鼠BMSCs细胞能否与心肌细胞建立有效地电机械连接，旨在为进一步进行“生物起搏”治疗提供实验依据。 方法 1.乳鼠心室肌细胞的原代培养：原代乳鼠心肌细胞采用消化法进行分离纯化，采用贴壁法培养，于共培养前一天将心肌细胞用50ug/mlDAPI标记过夜。 2.将已标记的心肌细胞分别与BMSCs、 hHCN4+BMSCs及hHCN4－BMSCs共培养。 3.共培养后计数各组细胞的自发搏动频率； 4.荧光显微镜下观察实验组共培养的两类细胞； 5.Westernblot检测缝隙连接蛋白（Connexin Cx）43的表达； 6.透射电镜观察细胞间缝隙连接形成情况； 结果 1.心肌细胞成功分离纯化：倒置显微镜可见经原代培养贴壁的心肌细胞间相互交织成网，，形成细胞簇，呈同步性自发搏动，DAPI标记的CM显示蓝色荧光。 2.共培养后，心室肌的自发搏动频率明显增高。空白对照组细胞搏动频率为90±7次/min，与HCN4－对照组（88±8次/min）比较差异无统计学意义（P0.05）；实验组搏动频率（129±12次/min）明显高于各对照组，差异有统计学意义（P0.05）。 3.荧光显微镜下观察发现存在解剖位置上相邻的BMSCs和CM。 4. Western blotting结果显示，hHCN4+BMSC与CM共培养组CX43表达明显高于hHCN4－BMSCs与CM共培养组。 5．透射电镜显示，hHCN4+BMSCs可与相邻细胞间形成指状交错的连接。 结论 1.心肌细胞与hHCN4基因修饰BMSCs能够进行共培养，并能够产生自发搏动。 2. hHCN4基因修饰的大鼠BMSCs可与CM建立有效的电机械连接，且可使心肌细胞的自发搏动频率明显增快。
【关键词】：人超级化激活环化核苷酸门控通道4基因 骨髓间充质干细胞 心肌细胞 共培养
【学位授予单位】：辽宁医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 英文缩略语表8-9
• 前言9-10
• 实验材料与方法10-18
• 结果18-20
• 讨论20-23
• 结论23-24
• 本研究创新性的自我评价24-25
• 参考文献25-28
• 文献综述28-41
• 参考文献36-41
• 在学期间科研成绩41-42
• 致谢42-43
• 个人简历43-44

【参考文献】

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本文编号：378387