CD38缺失对LPS诱导巨噬细胞炎性因子表达和分泌的影响及其分子机制

发布时间：2017-05-20 15:08

  本文关键词：CD38缺失对LPS诱导巨噬细胞炎性因子表达和分泌的影响及其分子机制，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景与目的：动脉粥样硬化是许多心血管疾病的重要成因。大量的实验证据和临床资料表明，炎症反应在动脉粥样硬化的发生发展过程中起重要作用，其机制与巨噬细胞等炎性细胞浸润并分泌大量炎性因子，促使泡沫细胞生成等密切相关。CD38是具有ADPR (ADP-ribosyl)环化酶和水解酶活性的双功能酶，它可分别催化NAD+生成cADPR和催化cADPR降解成ADPR，其酶活性位点均定位于胞外结构域。我们的前期实验显示，CD38基因缺失可使高脂饮食诱导的ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化损伤明显加重。本文旨在探讨CD38对巨噬细胞活化的影响及其可能的分子机制，从而为进一步阐明CD38在动脉粥样硬化形成中的作用及其机制提供线索和实验依据。 方法：1.巨噬细胞的诱导和培养：给野生型和CD38基因敲除小鼠腹腔注射0.5ml3%巯基乙醇酸钠诱导其巨噬细胞分泌，三天后收集小鼠腹腔的巨噬细胞并进行体外培养，，经鉴定后用于后续实验。2.巨噬细胞基因表达及炎性因子分泌：取原代培养的腹腔巨噬细胞并用LPS (1μg/ml)对其进行刺激，实验分为4组每组3个样本：①野生型(W.T.)未刺激组；②野生型(W.T.) LPS刺激组；③CD38-/-未刺激组；④CD38-/-LPS刺激组。利用RT-PCR或实时荧光定量PCR技术对TLR4和相关炎性因子如TNF-α，IL-1β及巨噬细胞炎症趋化因子MCP-1的mRNA表达量进行检测，同时用Western Blot技术对NF-κB蛋白表达量进行分析。 结果：1.镜下观察细胞形态，与文献描述相符，确认为巨噬细胞。2. CD38缺失使LPS诱导巨噬细胞炎性因子分泌及相关蛋白表达升高①LPS刺激后W.T.组与CD38-/-组均出现TLR4表达量升高，炎性因子TNF-α，IL-1β及炎症趋化因子MCP-1分泌增加；②与LPS刺激W.T.组比较，CD38-/-组中TLR4及NF-κB表达量显著升高；③LPS刺激后CD38-/-组炎性因子TNF-α，IL-1β及炎症趋化因子MCP-1分泌量较W.T.组增加。 结论：LPS可明显诱导CD38-/-小鼠原代培养巨噬细胞的M1型炎性因子分泌，提示CD38基因缺失可显著促进巨噬细胞介导的炎性反应，其机制可能与CD38缺失诱导巨噬细胞TLR4-NF-κB通路活化，进而促进炎性因子的合成与分泌有关。
【关键词】：CD38 动脉粥样硬化 巨噬细胞 炎性反应 TLR4 NF-κB
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 第1章 绪论11-16
• 1.1 CD38 与动脉粥样硬化11-16
• 1.1.1 CD38 简述11-12
• 1.1.2 动脉粥样硬化的产生及通路12-13
• 1.1.3 巨噬细胞(Macrophage)与动脉粥样硬化(AS)13-14
• 1.1.4. NF-κB 与动脉粥样硬化14-15
• 1.1.5 TLR/NF-ΚB 信号通路15-16
• 第2章 CD38 基因敲除小鼠原代巨噬细胞的分离和培养16-24
• 2.1 引言16
• 2.2 材料和方法16-20
• 2.2.1 CD38 基因敲除鼠的鉴定16-17
• 2.2.2 巨噬细胞（Macrophage）的原代培养及基因型鉴定17-20
• 2.3 结果20-23
• 2.3.1 CD38 基因敲除小鼠基因型鉴定20-21
• 2.3.2 巨噬细胞（Macrophage）原代培养及基因型鉴定21-23
• 2.4 讨论23-24
• 2.4.1 基因敲除小鼠的分类23
• 2.4.2 巨噬细胞的分型23-24
• 第3章 CD38 缺失在 LPS 诱导巨噬细胞炎性反应中的作用及其机制24-33
• 3.1 引言24
• 3.2 材料和方法24-28
• 3.2.1 TLR4 表达水平检测24-26
• 3.2.2 NF-κB 表达量检测26
• 3.2.3 荧光定量 PCR 检测巨噬细胞炎性因子分泌26-28
• 3.3 实验结果28-32
• 3.3.1 LPS 促进 CD38-/-与 WT 小鼠腹腔巨噬细胞 TLR4 的表达28-29
• 3.3.2 LPS 促进 CD38-/-与 WT 小鼠腹腔巨噬细胞 NF-κB 的表达29-30
• 3.3.3 LPS 促进 CD38-/-与 WT 小鼠腹腔巨噬细胞炎性因子的表达30-32
• 3.4 讨论32-33
• 3.4.1 LPS 与 TLR4 作用方式32
• 3.4.2 LPS 与 NF-κB 作用方式32-33
• 第4章 结论33-34
• 4.1 结论33-34
• 致谢34-35
• 参考文献35-38
• 附录38-40
• 综述40-54
• 参考文献47-54

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本文编号：381977