二氮嗪介导的深低温低流量小鼠模型脑保护作用的研究

发布时间：2017-05-25 14:15

  本文关键词：二氮嗪介导的深低温低流量小鼠模型脑保护作用的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：第一部分不同浓度二氮嗪对深低温低流量小鼠模型的脑保护作用 目的观察不同浓度二氮嗪对深低温低流量脑缺血再灌注小鼠模型的脑保护作用及初步分析二氮嗪发挥脑保护作用的机制。 方法将240只3周龄的C57BL/6健康小鼠随机分为假手术组(sham)、模型组(modell)、二氮嗪组(diazoxide)(2、5、10mg/kg)组、二氮嗪+渥曼青霉素组(diazoxide+wortmannin)(diazoxide,2、5、10mg/kg)共八组,每组30只。每组再平均分为再灌注2h、24h、72h3个亚组,每个亚组再平分为蛋白质组和脑组织大体标本组,最小组以5只为单位。根据实验要求建立深低温低流量动物模型,于再灌注不同时间点取小鼠脑组织。应用western blot技术分别检测各组脑组织中总akt、p-aktl的表达变化及对各组脑组织进行2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色,观察脑组织损伤程度。 结果再灌注24h和72h二氮嗪组p-aktl与其他组比较表达增高,差异有统计学意义(p0.05)；再灌注24h和72h二氮嗪2mg/kg组与其他二氮嗪组比较表达增高,差异有统计学意义(p0.05)。TTC染色结果显示再灌注24h和72h二氮嗪组与model组、sham组比较脑损伤减轻,差异有统计学意义(p0.05)；再灌注24h和72h二氮嗪2mg/kg组与其他二氮嗪组比较脑损伤减轻,差异有统计学(p0.05)。 结论二氮嗪对深低温低流量小鼠模型有脑保护作用,其发挥作用的机制可能是通过激活PI3K/Akt信号通路,进而调节Akt下游效应分子而实现的。二氮嗪的三个浓度,即2、5、10mg/kg,其中2mg/kg组对深低温低流量小鼠模型的脑保护作用更加明显。 第二部分二氮嗪介导的深低温低流量小鼠模型的脑保护作用及机制 目的探讨二氮嗪对深低温低流量小鼠模型的脑保护作用及分析其发挥作用的机制。 方法将270只3周龄C57BL/6健康小鼠根据基因型分为野生型(wt)、akt1基因敲除型、akt2基因敲除型三组,每组再分为假手术组(sham)、模型组(model)和二氮嗪组(diazoxide, dz),共9小组,每小组各30只。model组和dz组根据要求建立深低温低流量动物模型,而sham组除了不阻断双侧颈总动脉之外,其余操作同model组。各组均于再灌注2h、24h、72h取小鼠脑组织。应用western blot技术分别检测各组脑组织中总akt、akt1、akt3、p-akt1、p-gsk-3β蛋白的表达变化；应用Real Time PCR方法检测Akt1mRNA、Akt2mRNA和Akt3mRNA的变化及对各组脑组织进行2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色,观察脑组织损伤的情况。 结果在sham组、model组、dz组中,再灌注24h和72h akt1基因敲除组p-akt1、 p-gsk-3β蛋白表达低于wt组和akt2基因敲除组,差异有统计学意义(p0.05),而akt2基因敲除组与wt组相比,差异无统计学意义(p0.05),各基因型中dz组高于model组,model组高于sham组,差异有统计学意义(p0.05)。在sham组、model组、dz组中,再灌注24h和72h aktl基因敲除组与akt2基因敲除组、wt组相比脑损伤加重,差异有统计学意义(p0.05),akt2基因敲除和wt组相比,差异无统计学意义(p0.05),各基因型中model组重于dz组,dz组重于sham组,差异均有统计学意义(p0.05)。再灌注后的三个时间段各基因型中Akt1mRNA的表达model组高于sham组,dz组高于model组,差异均有统计学意义(p0.05)；Akt2mRNA的表达各基因型中sham、model、dz组相比,差异无统计学意义.05)。Akt3mRNA的表达各基因型中model组高于sham组,dz组高于model组,差异有统计学意义(p0.05),而三种基因型中,sham组之间、model组之间、dz组之间差异无统计学意义(p0.05)。 结论二氮嗪对深低温低流量小鼠模型有脑保护作用,其发挥作用的机制可能是通过激活P13K/Akt信号通路,活化aktl蛋白,进而调节Akt下游蛋白糖原合成激酶-3β的磷酸化水平而实现的。二氮嗪可能使得Aktl mRNA和Akt3mRNA表达增高,进一步调节p-aktl和p-gsk-3β蛋白表达增高的。在深低温低流量的过程中,Akt2mRNA的变化不明显,可能Akt2mRNA没有参与二氮嗪的脑保护作用。
【关键词】：二氮嗪 深低温低流量 脑缺血/再灌注损伤 PI3K/Akt信号通路 二氮嗪 深低温低流量 脑缺血/再灌注损伤 糖原合成激酶-3β PI3K/Akt信号通路
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R965;R-332
【目录】：

• 目录4-7
• 中文摘要7-11
• 英文摘要11-15
• 第一部分 不同浓度二氮嗪对深低温低流量小鼠模型的脑保护作用15-32
• 前言15
• 材料与方法15-22
• 结果22-25
• 讨论25-28
• 结论28-29
• 参考文献29-32
• 第二部分 二氮嗪介导的深低温低流量小鼠模型脑保护作用及机制32-57
• 前言32
• 材料与方法32-42
• 结果42-49
• 讨论49-52
• 结论52-53
• 参考文献53-57
• 综述57-70
• 参考文献65-70
• 攻读学位期间发表论文情况70-71
• 致谢71-72

【参考文献】

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1 CukSeong KIM,Jin Bong PARK,Kwang-Jin KIM,Seok Jong CHANG,Sung-Woo RYOO,Byeong Hwa JEON;Effect of Korea red ginseng on cerebral blood flow and superoxide production[J];Acta Pharmacologica Sinica;2002年12期

  本文关键词：二氮嗪介导的深低温低流量小鼠模型脑保护作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：393987