猪囊尾蚴膜联蛋白基因的原核表达和免疫学分析

发布时间：2017-05-31 18:20

  本文关键词：猪囊尾蚴膜联蛋白基因的原核表达和免疫学分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的对猪囊尾蚴AF239799-1膜联蛋白基因进行高效原核表达,对表达产物进行免疫学分析。方法通过DNA自动合成仪,用固相亚磷酸酰胺法合成一段5'端有NdeⅠ内切酶位点,3'端有XhoⅠ内切酶位点的猪囊尾蚴AF239799-1基因序列,并将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中,经测序、PCR及双酶切鉴定后,将其转入到宿主菌E.coli BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达,表达产物采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,并用Ni-NTA亲和层析柱纯化,纯化的重组蛋白用Western blot进行免疫学分析。结果该基因全长为1 250bp,编码区为2~1 042bp,编码346个氨基酸,理论分子质量、等电点分别为40.39ku和6.80。经DNA测序、PCR及双酶切鉴定,pET28a(+)-AF239799-1重组质粒构建成功。重组质粒在E.coli BL21(DE3)主要以包涵体形式表达,Western blot显示重组蛋白可被猪带绦虫病猪血清识别。结论猪囊尾蚴AF239799-1基因可在原核表达系统中高效表达,表达产物具有免疫反应性。
【作者单位】： 贵阳医学院临床生化教研室;
【关键词】： 猪囊尾蚴 AF-基因 原核表达 免疫反应性
【基金】：2012年度贵州省优秀科技教育人才省长基金项目[黔省专合字2012(43)号]
【分类号】：R383.34
【正文快照】： ***猪囊尾蚴病是一种人畜共患病,在许多国家包括中国在内有着广泛的流行区域,全国大约存在1 000万名囊尾蚴病患者,每年屠宰的囊尾蚴病猪大约有1200万头,每年造成经济损失大约20亿元,它不仅对人类健康造成严重危害,也对养猪行业造成巨大的经济损失[1-3]。因此,开展猪囊尾蚴病的

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本文编号：410300