伯氏疏螺旋体重组膜蛋白rBmpA对小鼠巨噬细胞和淋巴细胞体外作用研究

发布时间：2017-05-31 19:01

  本文关键词：伯氏疏螺旋体重组膜蛋白rBmpA对小鼠巨噬细胞和淋巴细胞体外作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究目的： 通过用伯氏疏螺旋体重组膜蛋白A(rBmpA)刺激体外培养细胞,包括昆明小鼠(KM)腹腔巨噬细胞、脾脏淋巴细胞及小鼠单核巨噬细胞株(RAW264.7),对其进行细胞增殖实验(MTT),并且收集不同rBmpA浓度刺激后细胞培养上清液,检测IL-1p,IL-6及IL-17细胞因子含量,来探讨各种细胞在莱姆关节炎致病机制中的作用。 研究方法： 1、探索昆明小鼠脾脏淋巴细胞分离技术,优化提取及培养条件,使其顺利获得较多淋巴细胞。 2、探索昆明小鼠腹腔巨噬细胞分离技术,优化提取及培养条件,使其获得更多腹腔巨噬细胞。 3、探索RAW264.7巨噬细胞株培养条件,培养方法。 4、对昆明小鼠脾脏淋巴细胞及RAW264.7巨噬细胞株进行MTT实验。 5、ELISA检测各细胞培养上清中炎性细胞因子IL-6、IL-17及IL-1β含量,探讨不同细胞在莱姆关节炎致病机制中作用。 研究结果： 1、经过探索,成功开展了昆明小鼠脾脏淋巴细胞和腹腔巨噬细胞分离及培养技术。 2、成功开展了RAW264.7巨噬细胞株培养技术。 3、对昆明小鼠脾脏淋巴细胞进行MTT实验,与正常对照组相比,差别有统计学意义(P0.05)。 4、检测昆明小鼠脾脏淋巴细胞培养上清液中炎性细胞因子IL-6和IL-17含量,与正常对照组比较,差别有统计学意义(P0.05)。 5、检测昆明小鼠腹腔巨噬细胞培养上清液中炎性细胞因子IL-lp含量,与正常对照组比较,差别无统计学意义(P0.05),分析和探讨了相关原因,为后期进一步研究奠定了基础。 6、对RAW264.7巨噬细胞株进行细胞增殖实验,与正常对照组相比,差别有统计学意义(P0.05)。 结论： 1、rBmpA在刺激脾脏淋巴细胞分泌炎性细胞因子IL-6和IL-17中起到关键作用。 2、rBmpA可引起脾脏淋巴细胞和RAW264.7巨噬细胞株增殖。 3、腹腔巨噬细胞IL-1β不受rBmpA影响。 4、rBmpA与莱姆关节炎密切相关。
【关键词】：莱姆关节炎 伯氏疏螺旋体 rBmpA 巨噬细胞 淋巴细胞
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R377
【目录】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 相关缩略词10-11
• 前言11-14
• 1 BmpA(Borrelia burgdorferi membrance protein A)11-12
• 2 BmpA与莱姆关节炎关系12
• 3 莱姆关节炎致病机制12-14
• 第一部分 rBmpA对小鼠脾脏淋巴细胞体外作用研究14-26
• 1 材料14-16
• 1.1 主要仪器14-15
• 1.2 主要试剂15
• 1.3 主要溶液试剂配制15-16
• 2 实验方法16-18
• 2.1 rBmpA蛋白液制备16
• 2.2 实验动物16
• 2.3 小鼠脾脏淋巴细胞的分离、培养及rBmpA作用研究16-18
• 2.4 统计学处理18
• 3 实验结果18-22
• 3.1 小鼠脾脏淋巴细胞分离18
• 3.2 小鼠脾脏淋巴细胞培养18
• 3.3 小鼠脾脏淋巴细胞形态观察18-19
• 3.4 小鼠脾脏淋巴细胞增殖活性检测19-20
• 3.5 PHA小鼠脾脏淋巴细胞分泌细胞因子IL-6的测定20-21
• 3.6 PHA对小鼠脾脏淋巴细胞分泌细胞因子IL-17的测定21-22
• 4 讨论22-24
• 5 结论24-26
• 第二部分：rBmpA对昆明小鼠腹腔巨噬细胞体外作用研究26-34
• 1 材料26-28
• 1.1 主要仪器26
• 1.2 主要试剂26-27
• 1.3 主要溶液试剂配制27-28
• 2 实验方法28-29
• 2.1 rBmpA蛋白液制备28
• 2.2 实验动物28-29
• 2.3 动物处理29
• 2.4 腹腔巨噬细胞收集及培养29
• 2.5 实验分组29
• 2.6 rBmpA对小鼠腹腔巨噬细胞分泌细胞因子的影响29
• 2.7 统计学处理29
• 3 实验结果29-31
• 3.1 细胞形态学观察30
• 3.2 rBmpA对小鼠腹腔巨噬细胞分泌细胞因子IL-1β的测定30-31
• 4 讨论31-32
• 5 结论32-34
• 第三部分 rBmpA对小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7增殖作用研究34-41
• 1 材料34-36
• 1.1 主要仪器34
• 1.2 主要试剂34-35
• 1.3 主要溶液试剂配制35-36
• 2 实验方法36-37
• 2.1 rBmpA蛋白液制备36
• 2.2 巨噬细胞株RAW264.7培养36-37
• 2.3 统计学处理37
• 3 实验结果37-39
• 3.1 细胞培养形态观察37
• 3.2 细胞增殖活性检测37-39
• 4 讨论39-40
• 5 结论40-41
• 参考文献41-45
• 综述45-66
• 参考文献58-66
• 攻读学位期间发表的论文66-67
• 致谢67

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 耿震;万康林;;莱姆病流行病学研究新进展[J];中国自然医学杂志;2007年02期

2 白生宾;陈红香;钟近洁;冯树梅;李甜;罗学港;;MTT法检测RAW264.7细胞活力及可能因素分析[J];中国现代医学杂志;2011年23期

  本文关键词：伯氏疏螺旋体重组膜蛋白rBmpA对小鼠巨噬细胞和淋巴细胞体外作用研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：410327