流式细胞术检测全血白细胞吞噬白念珠菌方法的建立和应用

发布时间：2017-06-02 13:08

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【摘要】：目的建立全血白细胞吞噬白念珠菌的流式细胞术检测方法。方法绘制白念珠菌生长曲线后,取生长对数中期的白念珠菌,以活体细胞示踪荧光探针二乙酰羧基荧光黄琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)标记,与以PC5标记的CD45单克隆抗体预标记的全血白细胞,在37℃分别反应10、30、60min(MOI≈10∶1),以流式细胞术观察CD45阳性细胞对白念珠菌的吞噬情况。结果白念珠菌在液体酵母浸出粉胨葡萄糖培养基(YPD)中37℃、50mL/LCO2培养,第5~11h为对数生长期。10mmol/LCFDA-SE染色30min,可使白念珠菌均匀着色;CD45阳性细胞和标记的白念珠菌作用10、30、60min,CD45阳性细胞中中性粒细胞的吞噬率分别为(80.1±6.1)%、(83.8±7.7)%和(92.3±11.2)%;单核细胞的吞噬率为(11.2±3.6)%、(15.8±4.4)%和(27.7±6.8)%,淋巴细胞作为无明显吞噬作用内参,其吞噬率为(0.9±0.3)%、(0.8±0.4)%和(5.2±1.6)%。结论成功建立流式细胞术检测全血白细胞吞噬白念珠菌的方法,全血白细胞与白念珠菌共孵育30min是较为合适的作用时间。
【作者单位】： 解放军白求恩国际和平医院检验实验科;
【关键词】： 流式细胞术 白念珠菌 吞噬
【基金】：河北省自然科学基金(C2010001882) 河北省卫生厅指导性课题项目(ZD20140031) 白求恩国际和平医院计划课题(201430)
【分类号】：R379.4;R392.12
【正文快照】： 白念珠菌(Candida albicans)是一种重要的机会致病性病原体,在宿主免疫功能受到损伤或者下降时,可以对人体发生侵袭性感染,造成宿主器官的严重损害甚至威胁生命[1]。近年来,侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis,IC)的患病率与致死率不断攀升[2-4],据调查,目前念珠菌血症占医

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