CRISPR-Cas9系统定向编辑TCR基因的sgRNA筛选

发布时间：2017-06-06 14:02

  本文关键词：CRISPR-Cas9系统定向编辑TCR基因的sgRNA筛选，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：为构建靶向T细胞抗原受体(T Cell Receptor,TCR)基因的CRISPR-Cas9基因组编辑系统,基于p X458质粒构建靶向TCR基因β链C区的CRISPR-Cas-sgRNA质粒,将其转染Hep G2细胞系,用流式细胞术检测转染效率;转染48 h后提取Hep G2细胞基因组DNA,扩增含有编辑位点的片段,测序分析该片段的峰图改变;对出现双峰的扩增片段做T-A克隆后测序分析,确定基因编辑发生的位置,并结合转染效率计算基因编辑效率.结果表明,成功构建含有3种sgRNA序列(N1、N2、S1)的p X458-sgRNA质粒,其转染效率分别为38.5%(N1)、39.7%(N2)和24.2%(S1);基因组PCR产物测序分析发现,S1组扩增片段在打靶位置出现杂峰;T-A克隆测序发现,20克隆有4个发生了基因编辑(20%),结合转染效率(24.2%)可知,编辑效率约为83%.可见,本文成功构建靶向TCR基因的CRISPR-CassgRNA质粒,并鉴定出基因编辑效率较高的一种sgRNA序列.
【作者单位】： 广东药学院生命科学与生物制药学院;广东省生物技术候选药物研究重点实验室;广州中医药大学基础医学院;
【关键词】： T细胞抗原受体 靶向 CRISPR 基因组 编辑
【基金】：国家自然科学基金资助项目(31100664,31300737,81303292)
【分类号】：R392
【正文快照】： 0引言T细胞抗原受体(T Cell Receptor,TCR)决定着T淋巴细胞的抗原识别特异性,在免疫识别中具有重要的靶向作用.将特定识别某种抗原的TCR基因转入普通的T细胞,将能够赋予细胞特定的抗原识别能力[1].Clay等人在黑色素瘤模型上进行的相关研究首先表明了TCR基因改造T细胞的可行性[

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本文编号：426551