表达鼠源IL-10嗜酸乳杆菌的构建及其对大鼠IBD的影响

发布时间：2017-06-06 12:19

  本文关键词：表达鼠源IL-10嗜酸乳杆菌的构建及其对大鼠IBD的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：益生菌源于希腊语“对生命有益的细菌”，通常定植于人体肠道、生殖系统中，通过改善宿主的微生态平衡从而达到一定的益生效果。研究发现益生菌紧密地与肠道粘膜上皮细胞结合，通过其本身的分泌物能够提高人体的内源性防御能力，同时通过与有害菌竞争肠上皮细胞来阻止有害菌的入侵和定植。当肠道中定植的嗜酸乳杆菌的数量达到一定水平时，通过其分泌的乳酸能改善和调节肠道的微生物菌群平衡，从而增强机体的抗菌能力，减少癌症的发生率；根据其在生长代谢过程中所产生的代谢产物以及与环境中其他菌群的竞争作用，对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌以及炭疽杆菌等致病菌具有较好的拮抗作用。IL-10主要由Th2细胞、巨噬细胞和活化的B细胞产生，不仅具有较强的抗炎能力，它能抑制IFN-γ以及促炎因子的产生和释放，同时还能诱导外周耐受和免疫抑制。 炎症性肠病（IBD）呈世界性分布，同时也严重危害着我国人民的健康，且近年来其发病率呈逐年上升趋势。大多数研究认为IBD是由多种因素相互作用所致的一种自身免疫性疾病，主要包括免疫、环境以及遗传等因素。所有致病因素中免疫在IBD的发生发展过程中起着极其重要的作用。大量研究资料表明：其发病过程是包括各种细胞因子在内的自身免疫异常，最终导致组织损伤。Th1/Th2免疫应答失衡是引起IBD发病的主要原因之一，致炎因子与抗炎因子失衡在IBD发病中起着重要的作用。IFN-γ是主要由Th1细胞产生的致炎细胞因子，具有广泛的免疫调节作用，在细胞因子网络调节中起重要作用。 本研究为构建表达鼠源IL-10的重组嗜酸乳杆菌，采用PCR技术克隆嗜酸乳杆菌信号肽序列与大鼠IL-10基因序列，连接后克隆到乳酸菌表达型穿梭载体pMG36e的序列中，得到重组质粒pMG36e-sp-IL10，电穿孔转化至嗜酸乳杆菌LA-5。挑选转化后的耐药菌落在含红霉素的MRS培养基中培养，抽提菌落DNA，进行PCR并测序，鉴定大鼠IL-10基因是否整合到嗜酸乳杆菌LA-5的基因组中，SDS-PAGE电泳鉴定及Western blot检测重组蛋白表达情况。结果证实，大鼠IL-10基因整合到嗜酸乳杆菌的基因组中；重组嗜酸乳杆菌产生的目的蛋白部分分泌到培养上清。说明，大鼠IL-10在重组嗜酸乳杆菌LA-5中得以表达并分泌。 本研究又在成功建立大鼠炎症性肠病（IBD）模型之后，，将重组嗜酸乳杆菌应用于大鼠炎症性肠病模型，应用荧光定量PCR检测相关因子IL-10、IFN-γ的浓度变化。为进一步探讨IBD的发生发展，以及它与益生菌和IL-10之间的关系提供了实验依据，为IBD的治疗提供新思路。
【关键词】：大鼠 嗜酸乳杆菌 IL-10 IBD
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：S856;R371
【目录】：

• 前言4-6
• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 英文缩略词表10-13
• 引言13-15
• 第一篇 文献综述15-30
• 第1章 嗜酸乳杆菌的研究进展15-20
• 1.1 嗜酸乳杆菌的生物学特征15
• 1.2 嗜酸乳杆菌的分离和鉴定15-16
• 1.3 嗜酸乳杆菌的生理功能16-18
• 1.4 嗜酸乳杆菌的应用18-20
• 第2章 IL-10 的研究进展20-27
• 2.1 IL-10 的生物学特点20-23
• 2.2 IL-10 的生理功能23-26
• 2.3 展望26-27
• 第3章 益生菌、IL-10 与 IBD 关系27-30
• 3.1 IBD27-28
• 3.2 益生菌、IL-10 与 IBD28-29
• 3.3 展望29-30
• 第二篇 研究内容30-66
• 第1章 表达鼠源 IL-10 嗜酸乳杆菌克隆载体的构建及鉴定30-46
• 1.1 材料与方法30-38
• 1.2 结果38-41
• 1.3 讨论41-45
• 1.4 小结45-46
• 第2章 重组质粒 pMG36e-sp-IL10 在嗜酸乳杆菌LA-5 中的表达检测46-52
• 2.1 材料与方法46-49
• 2.2 结果49-50
• 2.2.1 含红霉素的 MRS 固体培养基中嗜酸乳杆菌 LA-5 的生长情况49
• 2.2.2 鉴定49
• 2.2.3 SDS-PAGE 电泳鉴定及 Western blot 检测重组蛋白表达情况49-50
• 2.3 讨论50-51
• 2.4 小结51-52
• 第3章 大鼠炎症性肠病动物模型的建立52-56
• 3.1 实验方法52-53
• 3.2 结果53-54
• 3.3 讨论54
• 3.4 小结54-56
• 第4章 重组嗜酸乳杆菌对大鼠 IBD 的影响56-66
• 4.1 材料与方法56-58
• 4.2 结果58-63
• 4.3 讨论63-64
• 4.4 小结64-66
• 结论66-67
• 参考文献67-74
• 导师简介74-76
• 作者简介及科研成果76-77
• 致谢77

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：426370