伏立诺他对树突状细胞和实验性自身免疫性脑脊髓炎的调节作用研究

发布时间：2017-06-07 22:17

  本文关键词：伏立诺他对树突状细胞和实验性自身免疫性脑脊髓炎的调节作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：多发性硬化症(Multiple Sclerosis, MS)是一种中枢神经系统慢性炎症性脱髓鞘性疾病,目前临床上没有满意的治疗药物。因此,探索新药物对于改善MS的治疗非常重要。实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis, EAE)是MS的动物模型,也是自身免疫炎症反应基础研究的重要模型。MS和EAE均被证明是CD4阳性T细胞,主要是TH1和TH17细胞,介导的自身免疫炎症性神经退行性疾病。树突状细胞(Dendritic Cell, DC)是一种专职的抗原提呈细胞,在免疫反应的起始中起着重要作用。未成熟树突状细胞(immature Dendritic Cell, iDC)的主要功能是抗原提呈,而成熟树突状细胞(mature Dendritic Cell, mDC)主要功能是诱导T细胞活化。并且DC可根据不同的信号刺激而对应的分泌TH1、TH2、TH17以及Treg细胞分化相关的细胞因子,而这些不同亚型T细胞极化因子可以诱导初始T细胞向相应的T细胞亚型极化,进而与不同类型疾病相对应T细胞亚型行驶不同的生理功能。基于DC在免疫系统中的重要作用,它可能成为控制自身免疫和炎症性疾病的潜在治疗靶点。伏立诺他(Vorinostat)是一种组蛋白去乙酰化酶(Histone Deacetylase, HDAC)抑制剂,已被批准用于临床治疗皮肤T细胞淋巴瘤,但是伏立诺他对于自身免疫病如MS和其动物模型EAE的研究并不完善,这也是本研究的重点内容。 研究目的：体外实验探究组蛋白去乙酰化酶抑制剂伏立诺他对人CD14阳性单核细胞来源的DC的分化、成熟、抗原摄取和DC介导的T细胞增殖的影响,以及对炎症相关因子分泌的调节作用；体内实验进一步探究了伏立诺他对EAE作用和细胞机制。本研究为MS等炎症性疾病探索新的治疗途径。实验内容和方法：体外研究用磁珠分离法从人外周血单核细胞中分离出CD14阳性单核细胞,然后诱导向DC分化和成熟,用流式细胞术检测表面标记。用流式细胞术检测FITC-dextran摄取的方法检测iDC抗原摄取能力。用混合淋巴细胞反应方法检测mDC刺激T细胞增殖的能力。并用实时定量PCR检测细胞因子的分泌情况。体内研究应用小鼠注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein, MOG)诱导EAE,同时应用伏立诺他灌胃治疗,每天观察小鼠并做临床评分。脊髓切片用HE染色、Luxol fast blue染色和免疫组化染色。流式细胞术检测EAE中伏立诺他对脾脏中不同T细胞亚型的影响,以及对DC的影响。实验结果：体外实验流式细胞术结果表明伏立诺他降低iDC和mDC表面标记CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达,即抑制DC分化和成熟。并且,伏立诺他降低了iDC抗原摄取能力和mDC介导的T细胞增殖,抑制了DC中TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-12p35和IL-23p40的mRNA表达水平。体内实验显示伏立诺他治疗可降低EAE的发病率,推迟发病时间,降低了临床评分平均分、总分和最高分。HE和Luxol fast blue染色结果显示,伏立诺他缓解小鼠脊髓中炎症细胞浸润和脱髓鞘情况。脊髓石蜡切片免疫组化结果显示伏立诺他抑制T细胞和巨噬细胞浸润。而且,伏立诺他抑制EAE中TH1和TH17细胞,降低了DC表面标记表达。体内实验结果与体外伏立诺他抑制人CD14阳性单核细胞来源的DC的实验结果一致。 总之,伏立诺他可抑制人CD14阳性单核细胞来源的DC分化、成熟和抗原摄取及抗原提呈功能。伏立诺他可抑制中枢神经系统的自身免疫炎症反应,体内抑制DC、病理性TH1和TH17细胞,缓解EAE的发生和发展。伏立诺他对EAE具有治疗作用。本论文为应用HDAC抑制剂伏立诺他治疗MS等炎症相关疾病奠定了理论基础。
【关键词】：组蛋白去乙酰化酶抑制剂 伏立诺他 多发性硬化症 实验性自身免疫性脑脊髓炎 树突状细胞 T细胞
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R392;R744.51
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 目录8-10
• ~.略语/符号说明10-11
• 前言11-18
• 研究现状、成果11-17
• 研究目的、方法17-18
• 1 研究对象和方法18-33
• 1.1 主要实验材料、试剂与仪器设备18-20
• 1.2 试剂配制20-21
• 1.3 实验方法21-33
• 1.3.1 人CD14阳性细胞的分离和纯化21-22
• 1.3.2 DC分化和成熟22-23
• 1.3.3 DC表面标记表达分析23-24
• 1.3.4 iDC内吞作用分析24
• 1.3.5 混合淋巴细胞反应分析24-25
• 1.3.6 实时定量PCR25-26
• 1.3.7 EAE诱导、临床评分和治疗作用分析26-28
• 1.3.8 脊髓组织的石蜡切片制备及组化染色28-29
• 1.3.9 胞内细胞因子染色29-30
• 1.3.10 脾脏内DC比例的检测30-31
• 1.3.11 小鼠DC2.4细胞实验研究31-32
• 1.3.12 统计学分析32-33
• 2 结果33-49
• 2.1 伏立诺他抑制人单核细胞向DC分化33-34
• 2.2 伏立诺他抑制iDC的内吞功能34-35
• 2.3 伏立诺他抑制DC成熟35-37
• 2.4 伏立诺他抑制mDC诱导同种异体T细胞增殖37
• 2.5 伏立诺他抑制DC表达TH1和TH17细胞极化细胞因子37-39
• 2.6 伏立诺他缓解EAE临床发生和发展39-42
• 2.7 伏立诺他改善EAE鼠中枢神经系统炎症和脱髓鞘程度42-44
• 2.8 伏立诺他减少EAE鼠中枢神经系统T细胞和巨噬细胞浸润44-45
• 2.9 伏立诺他减少脊髓TH1和TH17细胞浸润45-46
• 2.10 伏立诺他体内抑制EAE脾脏中DC46-48
• 2.11 伏立诺他抑制小鼠髓系DC2.4细胞功能48-49
• 3 讨论49-53
• 结论53-54
• 参考文献54-59
• 发表论文和参加科研情况说明59-61
• 综述61-74
• 综述参考文献69-74
• 致谢74

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