弓形虫GRA6基因的重组、表达及鉴定

发布时间：2017-06-08 00:08

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【摘要】：目的构建弓形虫致密颗粒蛋白6(GRA6)基因重组质粒并在大肠埃希菌中进行表达。方法根据弓形虫GRA6基因序列设计并合成引物,用PCR方法从弓形虫基因组DNA中扩增GRA6基因片段,扩增产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳鉴定后,再克隆到pGEX-4T载体中,重组质粒经限制性内切酶BamHI、EcoRI酶切鉴定并测序后,将重组质粒转化大肠埃希菌BL21后并用IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE分析并纯化,以Western blot分析其反应原性。结果以弓形虫DNA为模板扩增GRA6基因片段,经1%琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增产物大小为693bp,与理论值相符;重组质粒经酶切鉴定构建成功,测序结果与GenBank上弓形虫RH株GRA6序列AF239283.1同源性100%;重组质粒转化菌经IPTG诱导后表达的GRA6融合蛋白分子质量单位约为52ku,与GST-GRA6的理论分子质量相符,该融合蛋白可被GST标签抗体识别。结论成功重组了弓形虫GRA6基因,表达蛋白具有反应原性,为弓形虫诊断抗原试剂盒的制备奠定了基础。
【作者单位】： 山东省医学科学院山东省寄生虫病防治研究所;济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院;
【关键词】： 弓形虫 致密颗粒蛋白 基因克隆 融合蛋白 蛋白纯化
【基金】：山东省自然科学基金项目(No.2009C03083) 山东省医药卫生科技计划项目(No.2011HW049,2014WS0330)
【分类号】：R382.5
【正文快照】： 弓形虫是一种寄生于有核细胞内的原虫,它在速殖子期侵入宿主细胞并不断增殖,从而溶解破坏细胞,导致严重的人兽共患病-弓形虫病,对于人类健康和畜牧业的发展造成了巨大的威胁[1]。弓形虫病临床症状复杂多样,给准确、快速诊断带来极大不便,因此寻找一种能快速检测弓形虫感染的方

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 刘瑾,张磊,赵晓岚,叶国玲,蔡小宁,刘琦;妊娠期弓形虫感染及妊娠结局的探讨[J];中国儿童保健杂志;2004年04期

2 李华文,陈观今;弓形虫致密颗粒蛋白结构功能及免疫[J];国外医学(寄生虫病分册);2004年02期

3 李越希,张锦海,陶开华,黄培堂;弓形虫GRA6蛋白和P30蛋白的融合表达、纯化及抗原性分析[J];生物工程学报;2003年06期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 李科荣;申丽洁;;特殊人群弓形虫感染的研究进展[J];大理学院学报;2007年02期

2 吴静;殷国荣;;弓形虫排泄/分泌抗原的免疫保护性研究进展[J];国际医学寄生虫病杂志;2006年06期

3 朱穗京;李玲群;;弓形虫抗原基因及临床诊断研究[J];科协论坛(下半月);2011年03期

4 袁飞群;;吕四地区妊娠妇女TORCH感染的调查分析[J];华北煤炭医学院学报;2011年01期

5 徐凤全,林玲;我国弓形虫病核酸疫苗研究概况[J];中国热带医学;2005年08期

中国博士学位论文全文数据库 前4条

1 肖月;应用三种抗原的弓形虫流行病学比较研究[D];吉林大学;2011年

2 王艳华;弓形虫代谢分泌抗原和表面蛋白1抗原表位研究[D];中国农业科学院;2011年

3 朱翔;弓形虫GRA6和SAG1基因克隆及其表达产物的应用研究[D];苏州大学;2003年

4 王妍;弓形虫GRA3基因的原核表达及单克隆抗体的制备与初步应用研究[D];延边大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 章黎;弓形虫排泄—分泌抗原（ESA）对小鼠部分免疫细胞亚群的影响[D];南京医科大学;2009年

2 蔡志杰;猪弓形虫代谢分泌抗原免疫应答的研究[D];甘肃农业大学;2010年

3 余劲术;新孢子虫NcSRS2和NcSAG1基因及重组蛋白免疫原性的研究[D];中国农业大学;2005年

4 刘娟娟;弓形虫排泄—分泌抗原（ESA）鼻内免疫小鼠诱导的免疫应答的观察[D];山西医科大学;2006年

5 祁光宇;弓形虫自然弱毒株（QHO）棒状蛋白2基因片段的克隆、表达及鉴定[D];甘肃农业大学;2007年

6 吴静;ESA和STAg鼻内免疫小鼠诱导的抗弓形虫感染保护性免疫应答[D];山西医科大学;2007年

7 芦峗;山羊弓形虫代谢分泌抗原免疫应答研究[D];甘肃农业大学;2009年

8 韩欣悦;弓形虫高反应原性抗原的筛选及其初步应用[D];吉林大学;2012年

9 张敏;弓形虫缓殖子抗原SAG2C/2D/2X核酸疫苗及优势表位抗弓形虫慢性感染的实验研究[D];山东大学;2014年

10 张晓磊;刚地弓形虫RH株ROP11基因真核表达载体的构建及核酸疫苗免疫保护作用的研究[D];河北北方学院;2014年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 吴增强;;英国弓形虫病的产前普查[J];国外医学(寄生虫病分册);1991年05期

2 贾雪梅;弓形虫致密颗粒蛋白的分子生物学研究进展[J];国外医学(寄生虫病分册);2000年03期

3 李文玺,杨俊宇;先天性弓形虫病的研究进展[J];黑龙江医学;2004年08期

4 袁仕善;孙文霞;陈婧;唐小异;鄢慧;;重组弓形虫致密颗粒蛋白7的表达及免疫活性分析[J];湖南师范大学学报(医学版);2010年01期

5 陈海峰,郑焕钦,徐劲,高世同,李华文,郭虹,周永安,陈观今;SAG1和ROP1混合基因真核表达质粒接种小鼠诱导产生拮抗致死性弓形虫感染的保护性免疫[J];热带医学杂志;2003年01期

6 李越希,张锦海,陶开华,黄培堂;弓形虫GRA6蛋白和P30蛋白的融合表达、纯化及抗原性分析[J];生物工程学报;2003年06期

7 陈明发;376例妇女弓形虫抗体检测结果分析[J];实用预防医学;2003年06期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 王学俭;;弓形虫致密颗粒蛋白6(GRA6)的研究进展[J];中国动物检疫;2014年02期

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本文编号：430726