iNOS在梗阻性黄疸大鼠模型肝组织中的表达及中药的干预作用

发布时间：2017-06-08 10:02

  本文关键词：iNOS在梗阻性黄疸大鼠模型肝组织中的表达及中药的干预作用，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的： 探索梗阻性黄疸时iNOS基因在大鼠肝组织中的表达变化及其意义；探讨梗阻性黄疸再通术后中药茵陈蒿汤对肝脏的保护作用及与iNOS基因表达的关系,为临床围手术期合理应用中药提供理论依据。 方法： 选择成年SD大鼠96只体重(250-300)g,雄性,动物级别为清洁级,随机将大鼠分组：(1)假手术对照组(S组)30只；(2)梗阻性黄疸组(O组)30只；(3)梗阻性黄疸再通模型组(OR组)18只；(4)梗阻性黄疸再通模型+中药灌胃组(ORC组)18只。S组与O组于术后1、3、7、10、14D,每时相点处死大鼠6只,OR组与ORC组均于梗阻7天后解除梗阻,并于解除梗阻后1、3、7D每个时相点处死大鼠6只,留取血清及肝组织标本。检测血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)含量；另取肝组织固定于5%中性福尔马林溶液,石蜡包埋,5μm切片行HE染色观察肝组织的病理改变,并用石蜡切片进行iNOS免疫组织化学染色,观察肝组织iNOS蛋白的表达情况；剩余肝组织经液氮速冻后置于-80℃冰箱,用RT-PCR观察大鼠肝组织iNOS mRNA的表达。 结果： 1.血清生化指标的变化：S组术后第1天ALT、AST轻度升高,后逐渐降低到正常值范围,差异无统计学意义；与S组比较,O组术后ALT、AST迅速增高,ALT于术后第1天达到峰值(P0.05),AST于术后第3天达到峰值(P0.05),后逐渐下降,梗阻后第10天,ALT、AST又重新升高；OR组与ORC组解除梗阻后ALT、AST均呈下降趋势,ORC组比OR组下降更明显(P0.05)。S组术后TBIL无明显变化,差异无统计学意义；与S组比较,O组梗阻后TBIL迅速增高,并于第3天达到峰值(P0.05),后缓慢下降；OR组与ORC组解除梗阻后TBIL均显著下降,ORC组比OR组下降更明显(P0.05)。 2.肝组织病理学改变：S组肝细胞无肿胀、坏死,肝细胞索排列整齐。O组大鼠肝组织可见炎性细胞浸润,细小胆管和无管腔的小胆管增生,纤维组织细胞增生,肝细胞出现变性坏死。OR组在解除梗阻后,随着时间的延长,肝组织内炎性细胞浸润逐渐减少,纤维组织细胞增生明显减轻,肝细胞变性坏死灶减少。ORC组肝细胞在解除梗阻后病理学改变优于OR组。 3. RT-PCR法检测iNOS mRNA的表达量：S组术后iNOS mRNA表达量保持低位水平,且差异无统计学意义；O组术后iNOS mRNA表达量缓慢升高,14天达到峰值,与S组比较具有统计学意义(P0.05)；OR组与ORC组解除梗阻后iNOS mRNA的表达量均有下降,7天时达到最低点,ORC组与OR组相比具有统计学意义(P0.05)。 4.免疫组化法检测大鼠肝组织iNOS的合成：S组术后iNOS蛋白表达不明显,且差异无统计学意义；O组术后iNOS蛋白表达量缓慢升高,14天时达到峰值,与S组比较具有统计学意义(P0.05)；OR组与ORC组解除梗阻后iNOS蛋白的表达量均有下降,7天时达到最低点,ORC组与OR组相比具有统计学意义(P0.05),此趋势与iNOS mRNA表达基本一致。 结论： 1.NO在梗阻性黄疸大鼠肝损害中具有双重作用。梗阻发生早期NO合成较少时,NO可扩张血管,改善肝脏功能。随着梗阻的进展,各种刺激因子引起iNOS表达增加,过量生成的NO具有细胞毒性,对梗阻性黄疸大鼠肝脏起损害作用。 2.梗阻性黄疸大鼠模型解除梗阻后给予中药茵陈蒿汤可以抑制iNOS mRNA的表达,减轻因NO过量合成导致的肝损伤,改善肝脏因梗阻引起的肝功能异常。临床治疗梗阻性黄疸患者术后因梗阻引起的肝功能异常时可以辩证使用该方剂,促进术后肝脏功能恢复,降低并发症发生率。 3.选择合理的手术方式,结合围手术期清热利湿中药的辅助治疗,可能为临床带来较好的治疗效果。中西医结合治疗方案有望成为目前治疗的一种新的补充。
【关键词】：梗阻性黄疸 诱导型一氧化氮合酶 丙氨酸转氨酶 天冬氨酸转氨酶 总胆红素 茵陈蒿汤
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R575.7;R-332
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 缩略语/符号说明11-12
• 前言12-14
• 研究现状、成果12-13
• 研究目的、方法13-14
• 一、胆道梗阻后大鼠肝脏的iNOS表达的实验研究14-30
• 1.1 对象和方法14-21
• 1.2 结果21-25
• 1.3 讨论25-28
• 1.4 小结28
• 1.5 第一部分参考文献28-30
• 二、茵陈蒿汤对胆道梗阻再通术后大鼠肝脏iNOS表达及肝功能影响的研究30-42
• 2.1 对象和方法30-31
• 2.1.1 实验动物及分组30
• 2.1.2 动物造模30
• 2.1.3 中药方剂30
• 2.1.4 标本采集30-31
• 2.1.5 观察指标及方法31
• 2.2 结果31-34
• 2.2.1 大鼠一般状态的观察31
• 2.2.2 大鼠血清ALT、AST的含量31-32
• 2.2.3 大鼠血清TBIL的含量32-33
• 2.2.4 光镜观察肝组织的病理改变33
• 2.2.5 肝组织iNOS mRNA的表达结果33
• 2.2.6 免疫组化检测肝组织iNOS蛋白的表达定量结果33-34
• 2.3 讨论34-39
• 2.4 小结39-40
• 2.5 第二部分参考文献40-42
• 结论42-43
• 发表论文和参加科研情况说明43-44
• 附录44-51
• 综述51-62
• 综述参考文献57-62
• 致谢62

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 唐春;别平;李昆;张玉君;马正伟;;梗阻性黄疸大鼠肝细胞线粒体DNA损伤的定量研究[J];第二军医大学学报;2007年01期

2 张人富;;妈咪爱联合茵栀黄对新生儿黄疸治疗的临床观察[J];赣南医学院学报;2010年02期

3 王海,周怀文,余秀专;钙拮抗剂抑制一氧化氮合酶活性防治肝硬化门脉高压症的作用[J];贵州医药;2000年01期

4 郭宇廷 ,周怀文 ,余秀专 ,张剑;一氧化氮在梗阻性黄疸患者肝损伤中的作用及其意义[J];贵州医药;2004年03期

5 吴其恺,杨大国,王植芳,王松,李慧涓;中西医结合治疗病毒性黄疸型肝炎135例[J];湖北中医杂志;2000年08期

6 孙涛;陈炜;;茵陈药理作用研究进展[J];中药与临床;2010年03期

7 齐文礼,宝力道,吕红岩,张彤;TNF-α、NO在梗阻性黄疸兔肝细胞超微结构损害中作用的实验研究[J];内蒙古医学院学报;2003年03期

8 朱秀群;茵陈蒿汤加味治疗新生儿病理性黄疸24例[J];河南中医药学刊;2000年06期

9 张来;占伯林;李群;;自拟复方茵陈蒿汤联合熊去氧胆酸治疗原发性胆汁性肝硬化30例[J];航空航天医学杂志;2013年02期

10 刘志伟;;茵陈有效成分6,7-二甲氧基香豆素在白鼠体内主要代谢产物的研究[J];世界中西医结合杂志;2007年12期

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本文编号：432118