重组人博卡病毒VP2病毒样颗粒免疫原性研究
发布时间：2017-06-09 02:00
本文关键词：重组人博卡病毒VP2病毒样颗粒免疫原性研究，，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：目的：人博卡病毒(Human Bocavirus,HBoV)的广泛传播已经严重影响到人类特别是儿童的生命健康。本课题旨在研究HBoV1和HBoV2的病毒蛋白2(viral protein2,VP2)病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs)的免疫原性,及免疫途径和免疫佐剂对病毒样颗粒免疫原性的影响,探讨HBoV VP2VLPs作为疫苗的可能性。 方法：通过重组杆状病毒感染草地夜蛾细胞(Spodoptera Frugiperda9.SF9)表达HBoV1VP2VLPs和HBoV2VP2VLPs,经氯化铯(Cesium Chloride,CsC1)不连续密度梯度离心纯化获得高纯度HBoV1VP2VLPs和HBoV2VP2VLPs。分别于实验第0、3、6w用15μg HBoV1VP2VLPs或HBoV2VP2VLPs加或者未加明矾佐剂,通过肌内注射(intramuscular injection, IM)或皮内注射(intracutaneous injection,ID)途径免疫小鼠,实验第8w收集小鼠血清及脾脏淋巴组织。探索酶联免疫斑点试验(Enzyme-linked immunospot, ELISPOT)检测HBoV VP2VLPs诱导特异性细胞免疫反应最佳实验条件,并检测HBoV VP2VLPs诱导的特异性细胞免疫反应强度；采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测血清特异性IgG抗体效价,综合评价HBoV1VP2VLPs和HBoV2VP2VLPs的免疫原性。从细胞免疫反应强度、IgG抗体效价与IgG抗体活性三方面,分析免疫途径和免疫佐剂对其免疫原性的影响,寻找最佳的免疫途径和免疫佐剂,并探讨HBoV1和HBoV2免疫血清的交叉反应。 结果： 1、多肽P3(GYIPIENEL)及P5(LYQMPFFLL)为HBoV1特异性T细胞表位,P8(GYIPVIHEL)为HBoV2特异性T细胞表位； 2、检测HBoV VP2VLPs诱导特异性细胞免疫反应的ELISPOT的最佳实验条件为：培养时间为24h,小鼠脾脏淋巴细胞浓度为5×105细胞/孔,特异性刺激多肽浓度为10μg/ml； 3、在特异性多肽的刺激下,HBoVl实验组特异性分泌IFN-y的细胞数为(178+53)/106细胞,HBoV2实验组特异性分泌IFN-y的细胞数为(156+50)/106细胞,与对照组比较两者差异均有统计学意义(p0.001) 4、HBoV VP2VLPs诱导机体产生高效价特异性IgG抗体(HBoV1实验组1:620000, HBoV2实验组1：380000)。同样剂量的HBoV1VP2VLPs免疫后小鼠血清IgG效价高于HBoV2VP2VLPs免疫后小鼠血清|gG效价p0.01)；HBoV1VP2VLPs免疫血清IgG活性系数为(58+12)%,HBoV2VP2VLPs免疫血清IgG活性系数为(62+7)%,均大于50%,两者之间无显著性差异(p0.05)； 5. HBoV1VP2VLPs和HBoV2VP2VLPs通过肌内注射或皮内注射免疫诱导的特异性细胞免疫反应强度、血清IgG效价和IgG活性均无显著性差异(p0.05)； 6、明矾佐剂降低HBoV VP2VLPs诱导细胞免疫反应强度(p0.001),增强HBoV VP2VLPs诱导的血清IgG效价(p0.05)和IgG活性p0.01)。 结论： 1、成功获得高纯度HBoV1VP2VLPs和HBoV2VP2VLPs; 2、首次获得2条HBoV1小鼠特异性T细胞表位多肽和1条HBoV2小鼠特异性T细胞表位多肽,并确定ELISPOT检测人博卡病毒VP2病毒样颗粒诱导特异性细胞免疫反应最佳实验条件； 3、HBoV1VP2VLPs和HBoV2VP2VLPs能诱导机体产生强烈的体液免疫反应和细胞免疫反应,具有很好的免疫原性,可用于疫苗的研究； 4、肌内注射和皮内注射途径对HBoV VP2VLPs免疫原性无影响,肌内注射更便捷； 5、明矾佐剂使HBoV VP2VLPs诱导的体液免疫反应增强,使HBoV VP2VLPs诱导的细胞免疫反应减弱。HBoV VP2VLPs作为预防性疫苗使用时应添加明矾佐剂,作为治疗性疫苗使用时应不加明矾佐剂。
【关键词】：人博卡病毒(HBoV) 病毒蛋白2(VP2) 病毒样颗粒(VLPs) 免疫原性
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R373
【目录】：
- 摘要3-6
- ABSTRACT6-12
- 第一章 引言12-15
- 第二章 材料和方法15-33
- 2.1 材料15-22
- 2.1.1 细胞及重组杆状病毒15
- 2.1.2 实验动物15
- 2.1.3 主要试剂15-17
- 2.1.4 主要溶液的配制17-20
- 2.1.5 主要仪器和耗材20-22
- 2.2 实验方法22-33
- 2.2.1 HBoV VP2 VLPs表达纯化及鉴定22-26
- 2.2.2 ELISPOT检测HBoV VP2 VLPs特异性细胞免疫反应最佳实验条件选择26-28
- 2.2.3 HBoV VP2 VLPs免疫原性研究28-32
- 2.2.4 统计学处理32-33
- 第三章 结果33-46
- 3.1 HBoV VP2 VLPs鉴定33-34
- 3.1.1 HBoV VP2 VLPs纯度鉴定33
- 3.1.2 HBoV VP2 VLPs形态鉴定33-34
- 3.1.3 HBoV VP2 VLPs蛋白定量34
- 3.2 ELISPOT检测HBoV VP2 VLPs特异性细胞免疫反应最佳实验条件选择34-39
- 3.2.1 HBoV1和HBoV2特异性刺激多肽生物信息学预测34-35
- 3.2.2 ELISPOT试验结果35
- 3.2.3 HBoV1和HBoV2特异性刺激多肽的选择35-36
- 3.2.4 细胞培养时间选择36-37
- 3.2.5 细胞培养浓度选择37-38
- 3.2.6 特异性刺激多肽浓度选择38-39
- 3.3 HBoV VP2 VLPs免疫原性研究39-45
- 3.3.1 HBoV VP2 VLPs诱导机体产生特异性细胞免疫反应39-40
- 3.3.2 HBoV VP2 VLPs诱导机体产生特异性体液免疫反应40-41
- 3.3.3 免疫途径对HBoV VP2 VLPs免疫原性的影响41-43
- 3.3.4 明矾佐剂对HBoV VP2 VLPs免疫原性的影响43-45
- 3.4 HBoV VLPs免疫血清交叉反应45-46
- 第四章 分析与讨论46-52
- 第五章 结论52-53
- 参考文献53-60
- 综述60-70
- 参考文献65-70
- 英文缩写词表70-72
- 攻读硕士期间发表的主要学术论文及参与课题72-74
- 致谢74-75
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 魏e
本文编号：434151
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/shiyanyixue/434151.html
最近更新
教材专著
