结核分枝杆菌Rv0757基因的原核表达及其编码蛋白对巨噬细胞功能的影响

发布时间：2017-06-11 23:00

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【摘要】：目的构建结核杆菌Rv0757基因原核表达重组质粒pET28a-Rv0757,并研究表达的目标蛋白对小鼠骨髓巨噬细胞株ANA-1细胞的作用。方法将扩增出的Rv0757基因重组到原核表达质粒pET28a(+),并通过SDS-PAGE和Western blot鉴定诱导表达的目的蛋白。纯化目标蛋白后将目标蛋白PhoP作用于小鼠ANA-1细胞,检测活细胞数、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、一氧化氮(NO)和细胞凋亡指标。结果成功构建出pET28a-Rv0757原核表达质粒,诱导表达的目标蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定分析,其相对分子质量约为32×103。目的蛋白作用于小鼠ANA-1细胞后对活细胞数和细胞上清LDH活力无明显影响,但可以明显抑制细胞释放NO和细胞凋亡。结论本研究成功构建了原核表达载体pET28a-Rv0757,并成功表达出目标蛋白,该蛋白对小鼠ANA-1细胞没有毒性损伤,但可以抑制细胞释放NO和细胞的凋亡。
【作者单位】： 四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室;
【关键词】： 结核分枝杆菌 Rv基因 PhoP蛋白 巨噬细胞功能
【基金】：国家重大传染病科技专项(No.2012X10003008-004) 博士点基金(No.20110981110046)资助
【分类号】：R378.911
【正文快照】： 结核杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)是结核病的病原菌,由结核杆菌引起的结核病是一种以呼吸道为主要传播途径,严重危害人类健康的传染病。WHO估计,2011年有870万新发结核病病例,因结核病而死亡的有140万人[1]。结核病的发病率、病死率因为近年耐药、多重耐药结核菌株的

【共引文献】

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1 吴坤鑫;张秀春;陈雄庭;;热带牧草种子抗真菌蛋白筛选初报[J];广东农业科学;2008年11期

2 杨燕;李炜;李晓鹤;罗莎莎;李小勇;;C1q对巨噬细胞抗结核中作用的影响及其机制研究[J];国际检验医学杂志;2014年15期

3 聂恒;高志芳;吴利先;;结核分枝杆菌MTB8.1蛋白自诱导发酵研究[J];大理学院学报;2014年08期

4 林东子;罗勇强;向文玉;孔彬;曾今诚;徐军发;;空洞型肺结核患者化学治疗过程中白细胞的动态分析[J];国际检验医学杂志;2015年08期

5 张才成;陈静;陈唐勇;章登珊;郑晓丰;李俊明;;mTOR特异性siRNA重组表达载体的构建及鉴定[J];实验与检验医学;2013年06期

6 何玉龙;张文清;何承文;李雪;郝秀静;李敏;李勇;吴月红;;结核分枝杆菌BCG和H37Ra对巨噬细胞凋亡的影响及其机制研究[J];农业生物技术学报;2015年05期

7 张婷;杨焕;周维;张庆超;周卫红;;结核杆菌中细胞色素P450蛋白的结构与功能研究进展[J];生物物理学报;2013年08期

8 梁晨;姜晓霞;张锋;王霞;吴芳;章乐;吴江东;张春军;张辉;樊超;庄睿;李文娟;张万江;;结核分枝杆菌PhoP/PhoR基因重组穿梭表达质粒的构建及鉴定[J];石河子大学学报(自然科学版);2013年06期

【二级参考文献】

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1 王莉新;王易;;Toll样受体与结核分枝杆菌[J];现代免疫学;2008年05期

2 朱玉山;陈俭;;线粒体与细胞凋亡调控[J];生命科学;2008年04期

3 柏银兰;薛莹;徐志凯;;Toll样受体与抗结核感染免疫[J];生物技术通讯;2006年06期

4 苗青;申阿东;;结核分枝杆菌与宿主巨噬细胞相互作用机制的研究进展[J];山西医科大学学报;2010年10期

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1 段斯亮;于声;苏晓庆;;贵阳腐霉类枯草菌素蛋白酶基因的原核表达[J];贵阳医学院学报;2008年03期

2 郑瑞;许晓群;张建华;张彩;刘金生;苏庆红;王郡甫;;重组人白细胞介素-21的原核表达及其复性与纯化[J];中国生化药物杂志;2008年04期

3 覃晓琳;刘朝奇;刘徽婷;汪龚泽;;HIV-1 Vif的克隆、表达与活性检测[J];中国人兽共患病学报;2010年12期

4 李翠琳;张帆;陈丹扬;王昊;郭强;杜军;;人源TNFα的原核表达及活性测定[J];中国生物工程杂志;2014年08期

5 范彬,张英起,颜真,赵宁,陈长生,药立波,苏成芝;人纤溶酶原饼环区5基因的原核表达及活性测定[J];中国生物化学与分子生物学报;2001年06期

6 王爽;朱道银;帖儒修;李娜;王瑜伟;;鼠抑铁素2蛋白的原核表达及鉴定[J];中国生物制品学杂志;2008年08期

7 李婧;林建炜;张静;郭风劲;;X盒结合蛋白1-u的原核表达及纯化[J];中国生物制品学杂志;2009年04期

8 戴鹤玲;徐立;谭岩;方艳秋;;人β_2-糖蛋白Ⅰ的基因克隆和原核表达、纯化及鉴定[J];中国社区医师(综合版);2005年24期

9 王增军;张炜;吴宏飞;眭元庚;;重组人前列腺特异性抗原的原核表达、纯化与鉴定[J];中华男科学杂志;2007年12期

10 钱冠华;蒲淑萍;郭风劲;Tsutomu MORI;Hideo KOCHI;段昌柱;;P53蛋白的原核表达及纯化[J];中国生物制品学杂志;2009年06期

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1 伍艳兰;黄斯勇;牛晓丽;张丽;陈茹菲;何飞;张萍;梁英民;刘利;;人Delta-like4ext-93-217原核表达、纯化及蛋白活性检测[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年

2 马文涛;闫若潜;吴志明;刘光辉;盛敏;谢彩华;;猪白细胞介素-6的原核表达及其生物学活性研究[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会论文集[C];2010年

3 王运华;张耀洲;;一个新的家蚕基因的克隆及其原核表达研究[A];华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会论文集[C];2006年

4 刘梅芬;赵雪丽;谢彩华;刘光辉;盛敏;闫若潜;吴志明;;猪白细胞介素-2的原核表达及生物学活性测定研究[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会论文集[C];2008年

5 于维麟;朱元祺;;金黄色葡萄球菌肠毒素B的基因克隆及原核表达[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年

6 李尧华;史冬梅;韩俊燕;李昕;于顺;陈彪;;14-3-3蛋白cDNA克隆、原核表达、中枢神经系统组化分析及其意义[A];中国神经科学学会第六届学术会议暨学会成立十周年庆祝大会论文摘要汇编[C];2005年

7 孙东波;冯力;刘杰;时洪艳;佟有恩;刘胜旺;童光志;;猪传染性胃肠炎病毒n基因的原核表达及重组蛋白的免疫活性分析[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集[C];2008年

8 王永强;韩菡;郑世军;;猪β防御素1基因的原核表达及体外抑菌作用分析[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会论文集[C];2010年

9 邓益锋;郑燕玲;杨俊花;周振雷;夏继飞;侯加法;;蛋鸡TRPV6基因的原核表达、纯化及抗体制备[A];中国畜牧兽医学会——第三届中国兽医临床大会论文集[C];2012年

10 胡阿勇;张春杰;李银聚;程相朝;吴庭才;张旭;廖成水;王晓利;;鸡白介素5基因的克隆分析及原核表达[A];第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集（下册）[C];2010年

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1 张晓鸣;人IL-16的原核表达与其功能的初步研究[D];中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）;2000年

2 曹秀利;杨树PtCDD基因的原核表达及酶活分析[D];南京林业大学;2008年

3 黄新河;小鼠TAp63γ的原核表达、纯化、结构及功能初步研究[D];四川大学;2007年

4 张大鹏;VP60蛋白的原核表达、抗体制备及VP60基因转化的研究[D];西北农林科技大学;2012年

5 张少斌;豌豆肌动蛋白异型体（PEAc1）的原核表达及其藻荧光探针的研制[D];中国农业大学;2004年

6 尹国华;利用Red重组系统构建dsRNA原核表达体系抗烟草花叶病毒的研究[D];山东农业大学;2009年

7 韩凌霞;猪圆环病毒2型基因的原核表达与单克隆抗体的制备及感染性分子克隆的动物接种试验[D];中国农业科学院;2003年

8 于扬;重组人源GPx4及其模拟物的原核表达、结构与功能的研究[D];吉林大学;2013年

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1 赵振春;牛卵泡抑素cDNA的克隆及其原核表达[D];中国农业大学;2004年

2 江良梁;乳源抗菌—免疫调节融合肽原核表达及其抗菌活性初步研究[D];安徽医科大学;2008年

3 罗芳;二聚化蜘蛛拖丝蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备[D];东北林业大学;2010年

4 贾伟;人类多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶2的原核表达、纯化及酶活检测[D];苏州大学;2005年

5 王永才;猪Sirtuin3基因的克隆及原核表达[D];河南农业大学;2007年

6 张舒婕;鸭MHCⅡα、β链的克隆和原核表达及其抗体制备[D];华中农业大学;2008年

7 彭江丽;Metase基因高效原核表达体系的建立、表达及活性测定[D];昆明医学院;2009年

8 贾如;细粒棘球蚴Eg95基因的克隆、原核表达及抗体制备[D];合肥工业大学;2009年

9 杨永胜;猪α1干扰素基因克隆与原核表达[D];河北农业大学;2010年

10 刘润先;维生素A结合蛋白基因的克隆及原核表达[D];内蒙古农业大学;2003年

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