人源抗发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒-Gn蛋白重组抗体的研究

发布时间：2017-06-12 02:02

  本文关键词：人源抗发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒-Gn蛋白重组抗体的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：为研制人源抗发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)Gn蛋白重组抗体,本研究利用噬菌体表面展示技术,以SFTSV全病毒颗粒和重组表达SFTSV-Gn蛋白为抗原,从人源抗SFTSV Fab噬菌体抗体库中筛选抗SFTSV-Gn蛋白的重组Fab抗体,通过ELISA对Fab抗体的结合特异性进行检测。将Fab抗体基因克隆入哺乳动物细胞表达载体HL51-14,瞬时转染293T细胞获得分泌表达的IgG抗体。通过ELISA、IFA和Western-blotting检测IgG抗体的结合特异性。采用亲和层析纯化IgG抗体,并用微量中和试验检测IgG抗体的中和活性。结果表明经过三轮富集筛选,以SFTSV病毒颗粒为抗原筛选出364株针对SFTS病毒核蛋白Fab抗体,没有筛选出特异性结合Gn蛋白的阳性克隆,而通过Gn蛋白筛选得到8株特异结合Gn蛋白的Fab抗体,其中5株来自Lambda库,3株来自Kappa库。ELISA、IFA和Western-blotting检测证实这8株IgG抗体均能特异性结合Gn蛋白。微量中和试验显示8株新筛抗体没有中和活性,但仍可为后续SFTSV人源单克隆抗体的研究提供借鉴和参考。
【作者单位】： 温州医科大学;中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所;
【关键词】： 噬菌体抗体库 重组抗体 发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒
【基金】：重大新药创制(2013ZX09304103001006)
【分类号】：R373
【正文快照】： 自2007年以来,中国多个省市出现高度散发发热伴血小板减少综合征病例,通过解析全基因序列,确定为布尼亚病毒科白岭病毒属的一种新病毒,命名为发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒[1]。长期以来对同属白蛉病毒属(Phlebovirus)的裂谷热病毒(RVFv)研究表明,糖蛋白对布尼亚病毒在高

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本文编号：442954