小鼠CX3CR1基因慢病毒过表达载体的构建及鉴定

发布时间：2017-06-12 16:05

  本文关键词：小鼠CX3CR1基因慢病毒过表达载体的构建及鉴定，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：构建小鼠CX3CR1基因的慢病毒过表达载体。 方法：采用Oligo核酸软件对Genbank上发表的小鼠cx3cr1mRNA序列进行分析，设计一对分别含有Age I、BamH I酶切位点的CX3CR1基因上下游引物，，PCR扩增出该基因的全序列cDNA，将其定向克隆入pUbi-MSC-EGFP多克隆位点，构建pUbi-MSC-CX3CR1-EGFP慢病毒表达载体。再通过氨苄青霉素抗性筛选、阳性转化子PCR鉴定，选取正确的克隆进行测序鉴定。重组慢病毒载体构建成功后,应用慢病毒包装质粒pHelper1.0,pHelper2.0及Lipofectamine2000共转染293T细胞获得病毒液，通过RT-PCR检测细胞中EGFP表达水平变化并计算病毒滴度。 结果：PCR及测序结果表明目的基因序列克隆正确，成功构建了含有小鼠CX3CR1基因的重组表达载体，并包装成为慢病毒，获得滴度为2×10~8TU/ml的病毒液。 结论：本课题成功构建慢病毒过表达载体pUbi-MSC-CX3CR1-EGFP，及滴度为2×108TU/ml的LV-CX3CR1-EGFP慢病毒液。为下一步研究慢病毒介导的CX3CR1基因转染骨髓间充质干细胞及其归巢能力的作用奠定基础。
【关键词】：CX3CR1 趋化因子 慢病毒载体
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R3416
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 摘要6-7
• ABSTRACT7-9
• 前言9
• 1 材料与方法9-20
• 2 结果20-23
• 3 讨论23-25
• 参考文献25-27
• 文献综述27-41
• 参考文献34-41
• 致谢41-42
• 攻读学位期间发表的学术论文42-43

【参考文献】

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1 王培园;李结;朱兴全;杨桂连;袁子国;;重组病毒载体研究进展[J];中国人兽共患病学报;2012年03期

  本文关键词：小鼠CX3CR1基因慢病毒过表达载体的构建及鉴定，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：444399