细粒棘球绦虫GAPDH蛋白的生物信息学分析及其重组表达纯化和酶活性检测

发布时间：2017-06-13 15:10

  本文关键词：细粒棘球绦虫GAPDH蛋白的生物信息学分析及其重组表达纯化和酶活性检测，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的以生物信息学预测细粒棘球绦虫甘油醛3-磷酸脱氢酶(EgGAPDH)编码基因及其编码蛋白的结构和功能,利用大肠杆菌原核表达系统高效表达EgGAPDH重组蛋白,体外检测其酶活性。方法运用各软件对EgGAPDH的理化性质、保守功能域、系统发生树和二级结构、三级结构等方面进行分析后,将EgGAPDH基因亚克隆于表达载体pET30a(+),转化入E.coli BL21(DE3)感受态细菌,表达、纯化重组蛋白,并利用底物3-磷酸甘油醛测定重组蛋白EgGAPDH的酶催化活性。结果 EgGAPDH cDNA序列长度为1 011bp,编码一个336个氨基酸的蛋白。该GAPDH蛋白理论相对分子质量为36 128.3Da,等电点为8.44,具有GAPDH蛋白家族的两个功能结构域,富含6种类型的特定功能位点。成功构建的原核表达载体pET30a(+)-EgGAPDH在E.coli BL21(DE3)中高效表达,且发现表达产物主要以可溶形式分布于裂解上清,制备甘油醛3-磷酸脱氢酶纯品并通过酶活检测显示其具有高效酶活性。结论 EgGAPDH基因可在原核系统中获得有酶催化活性的高效表达,为进一步研究其在糖代谢中的功能奠定了基础。
【作者单位】： 兰州大学基础医学院病原生物学研究所;海南医学院寄生虫学教研室;甘肃省新药临床前重点实验室;
【关键词】： 细粒棘球绦虫 甘油醛-磷酸脱氢酶 生物信息学 原核表达 酶活性检测
【基金】：国家自然基金资助项目(No.81171632)资助~~
【分类号】：Q78
【正文快照】： 细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg,又名单房包虫)病是流行于我国(特别是西北地区)常见的人兽共患寄生虫病,是我国规划防治的五大寄生虫病之一[1]。目前研究中,人们多采用多价复合疫苗即“鸡尾酒”式疫苗对其进行预防[2]。甘油醛3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde 3-phos-ph

【参考文献】

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1 尚海旭;井然;贾弘y，

本文编号：446854