辐射诱发基因组不稳定性肝细胞Ran基因过表达和RNAi模型的构建

发布时间：2017-06-15 00:01

  本文关键词：辐射诱发基因组不稳定性肝细胞Ran基因过表达和RNAi模型的构建，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的构建基因组不稳定细胞Ran基因过表达和RNAi模型,为进一步研究该基因在辐射诱发基因组不稳定的功能提供研究工具。方法根据Ran基因信息,以慢病毒载体GV218设计合成2种重组质粒,分别包含Ran基因全长序列以及阴性对照序列;以慢病毒载体GV248设计合成2重组质粒,分别包含Ran基因的小干扰序列以及用于干扰对照的阴性序列。利用Western blot和qPCR进行过表达和RNAi重组质粒表达的检测;通过转染293T细胞进行慢病毒的包装;利用qPCR和荧光法分别进行滴度的检测;再用包装好的慢病毒感染辐射诱导基因组不稳定性HL-7702肝细胞,利用qPCR检测Ran基因表达量。结果测序结果表明重组质粒构建成功,并能够有效转染293T。过表达病毒滴度为2.0×108 TU/mL;RNAi病毒滴度为3.0×108 TU/mL。过表达慢病毒能有效地上调Ran基因的表达,过表达效率为85%。RNAi干扰慢病毒能够有效抑制Ran基因的表达,抑制效率为73%。结论成功构建基因组不稳定肝细胞Ran基因过表达和RNAi模型,为进一步研究Ran基因在辐射诱发基因组不稳定细胞中的功能提供了有效的研究工具。
【作者单位】： 中国辐射防护研究院;
【关键词】： Ran基因 过表达 RNA干扰 慢病毒载体
【基金】：中国核工业集团公司青年科技创新团队项目
【分类号】：R3416
【正文快照】： !Ran(Ras-related nuclear protein)是原癌基因家族Ras相关的GTP酶(GTPase),参与一系列周期事件的调控,以确保细胞周期顺利进行[1]。有研究显示GTPase Ran能够直接抑制复制起始因子[2-3],防止细胞在同一个周期内重复复制,进而维持基因组的稳定性。电离辐射能够诱发基因组不稳

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 左雅慧;党旭红;;电离辐射诱发的非靶效应及其生物学意义[J];辐射防护通讯;2010年04期

2 曹毅,王仲文,沈波;辐射诱导的基因组不稳定性[J];国外医学(放射医学核医学分册);2003年02期

3 赵伯明;杨操;;条件性RNA干扰在基因治疗中的研究进展[J];华中科技大学学报(医学版);2014年04期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 左雅慧;辐射诱发HL-7702细胞基因组不稳定性研究[D];苏州大学;2010年

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 党旭红;左雅慧;原雅艺;刘红艳;刘建功;张睿凤;;RAN基因沉默对辐射诱发基因组不稳定肝细胞HL-7702凋亡及细胞周期的影响[J];辐射防护;2014年06期

2 原雅艺;党旭红;张睿凤;张忠新;任越;左雅慧;;基因组不稳定肝细胞CDT1基因过表达和RNAi慢病毒载体的构建[J];山西医科大学学报;2015年02期

3 周乐源;周菊英;徐晓婷;黄朝晖;;人脑胶质瘤细胞SHG-44照射后COX-2表达与放射敏感性的关系[J];肿瘤;2007年10期

中国硕士学位论文全文数据库 前3条

1 周乐源;辐射诱导SHG-44胶质瘤细胞COX-2表达上调及COX-2抑制剂塞来西布对脑胶质瘤细胞的放射增敏效应[D];苏州大学;2006年

2 刘静;电离辐射诱导B16细胞基因组非稳定性的实验研究[D];吉林大学;2010年

3 赵丹;嗜热四膜虫内Ran结合蛋白1的功能分析[D];山西大学;2013年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 刘炳辰,董连锴,金虎林,田中伟,穆传杰,周继文;γ射线诱发鼠骨髓干细胞染色体不稳定性传递及时相分析[J];癌变.畸变.突变;1998年02期

2 方福德,孟雁;癌基因组学研究进展[J];癌症进展;2003年Z1期

3 耿晓华;王仲文;;电离辐射诱发的基因组不稳定性和旁效应[J];辐射防护通讯;2005年06期

4 周永增;;辐射防护的生物学基础[J];辐射防护通讯;2006年04期

5 邵春林;何明远;;电离辐射旁效应对辐射防护的影响[J];辐射防护通讯;2009年05期

6 沈波,沈冰;CB法微核检测技术应用于诱导基因组不稳定性的研究[J];辐射研究与辐射工艺学报;2005年01期

7 胡凯骞;党秉荣;李文建;魏巍;荆西刚;刘金婷;高清祥;郭红云;张晓文;;~(12)C~(6+)重离子辐照对人肝细胞、肝癌细胞端粒酶活性表达的影响[J];辐射研究与辐射工艺学报;2008年03期

8 王转子;李文建;魏巍;荆西刚;曲颖;;电离辐射旁效应的研究方法概述[J];辐射研究与辐射工艺学报;2009年04期

9 吴晓薇;黄国城;;生物标志物的研究进展[J];广东畜牧兽医科技;2008年02期

10 胡华军,陈勇,洪艳;甲型肝炎病毒受体HAVcr-1及其与过敏性疾病的关系[J];国外医学.流行病学传染病学分册;2005年03期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 费敏;李平;赵婷婷;孙斯凡;古艳婷;王华;张浩军;杨靖;;EPHX2基因过表达质粒的构建及意义探讨[J];中国中西医结合肾病杂志;2014年02期

2 ;油酸可抑制ERBB2癌基因过表达[J];河南医学研究;2005年02期

3 晋学庆;王前胜;卢卓强;王华军;翁智远;;血管紧张素转化酶2基因过表达改善人脐静脉内皮细胞生长[J];福建医科大学学报;2012年05期

4 徐广峰;赵亚萍;陈小慧;高春林;王建国;郭锡熔;;NYGGF4基因过表达对脂肪细胞线粒体的影响[J];临床检验杂志;2011年04期

5 于廷曦,朱应葆,童坦君;HR24L基因过表达抑制细胞凋亡[J];北京大学学报(医学版);2002年01期

6 李孟森;周升;李刚;;Livin基因过表达与肿瘤耐药的研究进展[J];中国药物与临床;2006年02期

7 林宁;梁松;曹新国;张敏;史春梅;季晨博;郭锡熔;;LYRM1基因过表达对3T3-L1脂肪细胞线粒体代谢的影响[J];临床检验杂志;2013年07期

8 李骏白;黄瑞燕;;HER-2基因过表达的乳腺癌病人内分泌治疗探讨[J];江西医药;2007年04期

9 周凤云;潘杨滨;何志娟;毛伟平;李文秀;刘宣宣;徐，

本文编号：450847